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原文传递一种高有机质土壤中痕量叶绿素的测定方法

专利名称：	一种高有机质土壤中痕量叶绿素的测定方法
摘要：	本发明公开了一种高有机质土壤中痕量叶绿素的测定方法，包括以下步骤：S1、取材：选取待测土壤样品和绿色植物样品，进行冷冻干燥；S2、叶绿素的提取；S3、利用紫外‑可见分光光度法测定绿色植物叶绿素提取液在波长为663nm和645nm下的光密度，并采用Lichtenthaler的方法计算绿色植物叶绿素提取液中叶绿素a的含量；S4、三维荧光光谱测定；S5、绘制标准曲线，建立回归方程；S6、待测土壤中叶绿素的含量的测定。本发明利用低背景的三维荧光光谱，解决了痕量叶绿素在可见紫外光谱中，其吸收光受泥炭，高有机质土壤等有色背景干扰较大的难题，突破了叶绿素的测定只限于绿色植物的局限性，本发明方法可广泛用于研究绿色植物凋落及腐殖化的进程。
专利类型：	发明专利
申请人：	湖北民族大学
发明人：	卜贵军;邸慧慧;徐洁;吴林;宋益;陈尧
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T05:00:00+0805
申请号：	CN201911381358.2
公开号：	CN111103276A
代理机构：	北京卓特专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	段宇
分类号：	G01N21/64;G;G01;G01N;G01N21;G01N21/64
申请人地址：	445000 湖北省恩施土家族苗族自治州学院路39号
主权项：	1.一种高有机质土壤中痕量叶绿素的测定方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、取材：选取待测土壤样品和绿色植物样品，进行冷冻干燥； S2、叶绿素的提取：准确称取冷冻干燥后的待测土壤样品和绿色植物样品于容器中，然后分别向容器中加入95％(v/v)乙醇溶剂，封口密封后于避光下提取叶绿素，制得待测土壤叶绿素提取液和绿色植物叶绿素提取液； S3、利用紫外-可见分光光度法测定绿色植物叶绿素提取液在波长为663nm和645nm下的光密度，并采用Lichtenthaler的方法计算绿色植物叶绿素提取液中叶绿素a的含量： Chl a(mg/g)＝(12.7OD663–2.69OD645)*V/1000W (1) 式中：Chl a为叶绿素a的含量(mg/g)； OD663和OD645分别为绿色植物叶绿素提取液在波长663nm和645nm下测量的光密度； V为绿色植物叶绿素提取液的体积(mL)； W为绿色植物的质量(g)； S4、三维荧光光谱测定：将步骤S2制备的绿色植物叶绿素提取液用不同体积的95％(v/v)乙醇溶剂进行稀释，配制不同浓度的叶绿素标准液，同时配制95％(v/v)乙醇溶剂作为空白对照体系，然后使用荧光分光光度计进行扫描，得到不同浓度的叶绿素标准液的荧光峰强度FLa标n和95％(v/v)乙醇溶剂的荧光峰强度FLa空，空白扣除，计算得到△FLa标n＝FLa标n-FLa空； S5、绘制标准曲线，建立回归方程：以△FLa标n对叶绿素标准液的浓度作标准曲线，建立回归方程； S6、待测土壤中叶绿素的含量的测定：按照步骤S4荧光光谱的实施条件对待测土壤叶绿素提取液进行扫描，得到相同的激发波长/发射波长时的荧光峰强度FLa样，扣除空白，计算ΔFLa样＝FLa样-FLa 空，然后利用S5建立的回归方程计算出待测土壤中叶绿素的含量。 2.根据权利要求1所述的一种高有机质土壤中痕量叶绿素的测定方法，其特征在于，步骤S1中，待测土壤样品以及绿色植物样品要同时取样，所述冷冻干燥处理在真空冷冻干燥机下进行，所述绿色植物样品为泥炭藓、桂花叶或刚竹竹叶，所述待测土壤样品由相应的泥炭藓、桂花叶或刚竹竹叶在厌氧的环境中不完全降解所形成。 3.根据权利要求1所述的一种高有机质土壤中痕量叶绿素的测定方法，其特征在于，步骤S2中，所述绿色植物中叶绿素的提取的步骤，包括：准确称取真空干燥后的绿色植物样品装入容器中，然后向容器中加入95％(v/v)乙醇溶剂，使绿色植物样品完全浸入溶剂中，加盖，于避光20-25℃下浸提6-10h，至绿色植物完全变白，即得到绿色植物叶绿素提取液。 4.根据权利要求1所述的一种高有机质土壤中痕量叶绿素的测定方法，其特征在于，步骤S4中，所述使用荧光分光光度计进行扫描的步骤，包括：使用荧光分光光度计在激发波长为300-480nm、发射波长为600-720nm的条件下进行扫描，分别得到不同浓度的叶绿素标准液和95％(v/v)乙醇溶剂的三维荧光光谱，然后选择激发波长/发射波长为300-480nm/600-720nm范围内的荧光峰，测定不同浓度的叶绿素标准液的荧光峰强度FLa标n和95％(v/v)乙醇溶剂的荧光峰强度FLa空，空白扣除，计算得到△FLa标n＝FLa标n-FLa空。 5.根据权利要求1所述的一种高有机质土壤中痕量叶绿素的测定方法，其特征在于，步骤S4中，所述n＝6，将步骤S2制备的绿色植物叶绿素提取液用不同体积的95％(v/v)乙醇溶剂进行稀释，稀释倍数依次为0倍、1倍、5倍、10倍、50倍、100倍。 6.根据权利要求1所述的一种高有机质土壤中痕量叶绿素的测定方法，其特征在于，步骤S4和S6中，所述荧光分光光度计的测试条件为：光电倍增管负高压为700V，激发和发射狭缝宽度均为5nm；光谱仪扫描范围为激发波长/发射波长(Ex/Em)＝300-480nm/600-720nm，步长均为5nm。 7.根据权利要求6所述的一种高有机质土壤中痕量叶绿素的测定方法，其特征在于，所述光谱仪扫描范围为激发波长/发射波长(Ex/Em)＝400-410nm/660-675nm。
所属类别：	发明专利