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原文传递一种新型冠状病毒N抗原的背景荧光免疫层析试纸条及制备方法

专利名称：	一种新型冠状病毒N抗原的背景荧光免疫层析试纸条及制备方法
摘要：	本发明公开了一种新型冠状病毒N抗原的背景荧光免疫层析试纸条及制备方法。试纸条包括PVC底板，在PVC底板上从左到右依次搭建样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸。在检测线和质控线上预先固载荧光染料。所述金标结合垫上包被有胶体金标记的鼠抗人新型冠状病毒1号单克隆抗体；所述硝酸纤维素膜上包被有鼠抗人新型冠状病毒2号单克隆抗体作检测线，以及包被有新型冠状病毒重组抗原作为质控线。本发明背景荧光免疫层析试纸条采用夹心/竞争结合的模式检测新冠病毒N抗原，具有较好的灵敏性和特异性，并且回收率较高，为临床使用提供了极大便利。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	桂林理工大学
发明人：	潘宏程;吴杰;方萍;张连明;徐安安;杨广田;钟婷
专利状态：	有效
申请日期：	2021-11-29T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-25T00:00:00+0800
申请号：	CN202111427210.5
公开号：	CN114236120A
分类号：	G01N33/569;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/58;G01N33/533;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/569;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/58;G01N33/533
申请人地址：	541004 广西壮族自治区桂林市七星区建干路12号
主权项：	1.基于新型冠状病毒N抗原的背景荧光免疫层析试纸条，其特征在于：所述PVC底板上从左到右依次为样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述金标结合垫上包被有胶体金标记的鼠抗人新型冠状病毒1号单克隆抗体；所述硝酸纤维素膜上包被有鼠抗人新型冠状病毒2号单克隆抗体作检测线，以及包被有新型冠状病毒重组N抗原作为质控线(竞争线)；所述背景荧光染料的固载液为由以下重量百分数的组分组成：余量为0.01M、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液。 2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒N抗原的背景荧光免疫层析试纸条，其特征在于：所述结合垫上的1mg/ml新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体1的量16.8uL，在结合垫上包被量为400uL：所述硝酸纤维素膜上包被有鼠抗人新型冠状病毒2号单克隆抗体浓度为2mg/ml，包被量为6uL；所述新型冠状病毒重组N抗原的浓度为0.5mg/ml，包被量为6uL。 3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒N抗原的背景荧光免疫层析试纸条，其特征在于：所述结合垫通过结合垫预处理液处理；所述结合垫处理液包括以下原料：5％蔗糖，1％吐温-20，1％BSA溶解于0.01M，pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液。 4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒N抗原的背景荧光免疫层析试纸条，其特征在于：所述样品垫通过样品垫预处理液处理：所述样品垫处理液包括以下原料：1％吐温-20，1％BSA溶解于0.01M，pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液。 5.根据权利要求1所述的新型冠状病毒N抗原的背景荧光免疫层析试纸条，其特征在于：所述胶体金粒径为20-40nm。 6.根据权利要求1所述的新型冠状病毒N抗原的背景荧光免疫层析试纸条，其特征在于：所述样品垫和结合垫均为玻璃纤维素膜。 7.根据权利要求1所述的新型冠状病毒N抗原的背景荧光免疫层析试纸条，其特征在于：所述胶体金的制备，包括以下步骤： 1)在加热条件下加入按总量计算0.01％的氯金酸溶液； 2)在加热条件下沸腾3分钟后加入按总量计算1％的柠檬酸三钠； 3)在加热条件下进行反应，从而制备所需粒径大小的胶体金溶液。 8.根据权利要求1-7所述的新型冠状病毒N抗原的背景荧光免疫层析试纸条，其特征在于，包括以下步骤： 1)制备金标结合垫，在结合垫上包被胶体金标记的的鼠抗人新型冠状病毒1号单克隆抗体； 2)制备硝酸纤维素膜，在硝酸纤维素膜上涂布鼠抗人新型冠状病毒2号单克隆抗体作检测线，涂布新型冠状病毒重组N抗原作为质控线(竞争线)； 3)在PVC底板上从左到右依次搭建样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸。 9.根据权利要求8所述的新型冠状病毒N抗原的背景荧光免疫层析试纸条，其特征在于:所述金标结合垫的制备包括以下步骤： 1)取一支1.5mL离心管，加入1ml胶体金溶液，用碳酸钾溶液调节溶液的pH后加入16.8uL的1mg/ml单克隆抗体1，置于4摄氏度冰箱中结合半小时后取出，加入50uL10％BSA溶液封闭1小时候后取出以12000r/min、4℃的条件下离心20min； 2)取出后用含1％BSA、5％蔗糖的0.01M,pH＝7.4的PBS复溶液复溶； 3)将复溶液涂布在预处理过的结合垫上； 4)将该结合垫在37℃烘箱中烘干1小时后取出密封保存，即得到金标结合垫。 10.一种新型冠状病毒N抗原的背景荧光免疫层析试纸条及制备方法，其特征在于：所述试纸条包括权利要求1-9任一项所述的背景荧光免疫层析试纸条。
所属类别：	发明专利