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原文传递用于检测颗粒物中有机物毒性的测试方法

专利名称：	用于检测颗粒物中有机物毒性的测试方法
摘要：	本发明公开了用于检测颗粒物中有机物毒性的测试方法，具体按照以下步骤实施：步骤1，对颗粒物进行预处理，提取有机组分，得到颗粒物有机组分染毒液；步骤2，大肠杆菌菌液培养；步骤3，将所述步骤2中培养好的大肠杆菌菌液稀释，并接入384孔板中，然后培养箱中培养至对数期；步骤4，将所述步骤1中的颗粒物染毒液等梯度稀释，与步骤3中的在对数期的大肠杆菌进行混合，确定颗粒物样本最大耐受浓度；步骤5，将所述步骤4中的最大耐受浓度等梯度稀释，并将稀释过后的样品溶液加入到培养好的384孔板中，送入酶标仪进行2h检测；步骤6，通过计算TELIgenei和TELItotal对颗粒物的毒性进行定量分析。该发明能够定量确定颗粒物中有机物对环境的毒性效应。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	陕西;61
申请人：	西安理工大学
发明人：	何剑;王珊珊;郑兴;胡宇波
专利状态：	有效
申请日期：	2021-11-26T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-15T00:00:00+0800
申请号：	CN202111423142.5
公开号：	CN114184779A
代理机构：	西安弘理专利事务所
代理人：	韩玙
分类号：	G01N33/543;G01N33/53;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/543;G01N33/53
申请人地址：	710048 陕西省西安市碑林区金花南路5号
主权项：	1.用于检测颗粒物中有机物毒性的测试方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：步骤1，对颗粒物进行预处理，提取有机组分，得到颗粒物有机组分染毒液；步骤2，大肠杆菌菌液培养；步骤3，将所述步骤2中培养好的大肠杆菌菌液稀释，并接入384孔板中，然后在培养箱中培养至对数期；步骤4，将所述步骤1中的颗粒物染毒液等梯度稀释，与步骤3中的在对数期的大肠杆菌进行混合，确定颗粒物样本最大耐受浓度；步骤5，将所述步骤4中的最大耐受浓度等梯度稀释，并将稀释过后的样品溶液加入到培养好的384孔板中，送入酶标仪进行2h检测；步骤6，通过计算TELIgenei和TELItotal对颗粒物的毒性进行定量分析。 2.根据权利要求1所述的用于检测颗粒物中有机物毒性的测试方法，其特征在于，所述步骤1具体为：取颗粒物样品，加入到装有有机溶剂的离心管中进行超声震荡，然后对离心管进行氮吹干，再加入超纯水，超声震荡，用滤膜过滤，得到颗粒物有机组分染毒液。 3.根据权利要求2所述的用于检测颗粒物中有机物毒性的测试方法，其特征在于，所述有机溶剂为甲醇和丙醇的混合物，其中甲醇和丙醇按照体积比1:1混合。 4.根据权利要求2所述的用于检测颗粒物中有机物毒性的测试方法，其特征在于，所述滤膜为0.45μm滤膜，所述超纯水和有机溶剂的体积比为1:1，两次超声震荡的时间均为30min。 5.根据权利要求1所述的用于检测颗粒物中有机物毒性的测试方法，其特征在于，所述步骤2具体为：在96微孔板中加入培养基及大肠杆菌，在恒温培养箱中培养，得到大肠杆菌菌液。 6.根据权利要求5所述的用于检测颗粒物中有机物毒性的测试方法，其特征在于，所述培养箱中的温度为36℃，在培养箱中的培养时间为16-22h。 7.根据权利要求1所述的用于检测颗粒物中有机物毒性的测试方法，其特征在于，所述步骤3中将5×M9培养基按照比例稀释成1×M9，然后大肠杆菌用1×M9培养基按1：5稀释，将培养基及稀释好的大肠杆菌菌液接入384孔板中。 8.根据权利要求1所述的用于检测颗粒物中有机物毒性的测试方法，其特征在于，所述步骤4具体为：将颗粒物染毒液依次10倍稀释7个浓度梯度，每个浓度的颗粒物染毒液分别与对数期的大肠杆菌混合，用大肠杆菌中的U66进行预实验，放入酶标仪中同时进行吸光度和荧光读数，在2h内间隔5min测定一次，当大肠杆菌的存活率≥95％，得到EC5的浓度，该浓度为颗粒物样本的最大耐受浓度。 9.根据权利要求1所述的用于检测颗粒物中有机物毒性的测试方法，其特征在于，所述步骤5中将最大耐受浓度依次10倍稀释6个浓度梯度。 10.根据权利要求1所述的用于检测颗粒物中有机物毒性的测试方法，其特征在于，所述步骤6中通过式(1)-(2)计算TELIgenei和TELItotal：其中，t是暴露时间，n是特定基因的数量，Wi是gene(i)的权重因子。
所属类别：	发明专利