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原文传递免疫磁珠净化-酶联免疫试验检测莱克多巴胺的方法及其单链抗体

专利名称：	免疫磁珠净化-酶联免疫试验检测莱克多巴胺的方法及其单链抗体
摘要：	本发明公开了免疫磁珠净化‑酶联免疫试验检测莱克多巴胺的方法及其单链抗体。所述方法包括(1)采用免疫磁珠处理样品获得icELISA待检样品，实现所述样品中莱克多巴胺富集；(2)采用莱克多巴胺为包被原，采用所述的单链抗体或其抗原结合部分为一抗，通过间接酶联免疫反应检测步骤(1)获得的icELISA待检样品，确定所述样品是否含有莱克多巴胺或所述样品中莱克多巴胺含量。本发明提供的方法分离效率高，检测限为4.57μg/kg，方法简便、稳定性好，可以提高工作效率。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国农业大学
发明人：	李建成;李苗;黄婧洁;陈莹娴;马月娇
专利状态：	有效
申请日期：	2021-12-03T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-15T00:00:00+0800
申请号：	CN202111471744.8
公开号：	CN114184780A
代理机构：	北京纪凯知识产权代理有限公司
代理人：	张羽
分类号：	G01N33/543;G01N33/58;C07K16/44;C12N15/13;G;C;G01;C07;C12;G01N;C07K;C12N;G01N33;C07K16;C12N15;G01N33/543;G01N33/58;C07K16/44;C12N15/13
申请人地址：	100193 北京市海淀区圆明园西路2号
主权项：	1.莱克多巴胺或莱克多巴胺含量的检测方法，其特征在于：包括 (1)采用权利要求7所述的免疫磁珠处理样品获得icELISA待检样品，实现所述样品中莱克多巴胺富集； (2)采用莱克多巴胺为包被原，采用权利要求4或5所述的单链抗体或其抗原结合部分为一抗，通过间接酶联免疫反应检测步骤(1)获得的icELISA待检样品，确定所述样品是否含有莱克多巴胺或所述样品中莱克多巴胺含量。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)包括混合样品和5％氨化甲醇，离心后收集上清液，吹干上清液，用PBS复溶，加入正己烷除脂，除去正己烷层，收集下层提取液；混合下层提取液与权利要求7所述的免疫磁珠反应获得富集莱克多巴胺的免疫磁珠；采用纯甲醇洗脱富集莱克多巴胺的免疫磁珠获得提取液，即为icELISA待检样品。 3.莱克多巴胺的单链抗体或其抗原结合部分，其特征在于：所述单链抗体或其抗原结合部分含有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区均由决定簇互补区和框架区组成；所述决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；所述重链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.2第153-159位所示；所述重链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.2第179-183位所示；所述重链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.2第225-234位所示；所述轻链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.2第24-39位所示；所述轻链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.2第55-61位所示；所述轻链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.2第94-102位所示。 4.根据权利要求3所述的单链抗体或其抗原结合部分，其特征在于：所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.2第128-245位所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNo.2第1-112位所示。 5.与权利要求3或4所述的单链抗体或其抗原结合部分相关的生物材料，所述生物材料为如下任一种： B1)编码权利要求3或4所述的单链抗体或其抗原结合部分的核酸分子； B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒； B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体； B4)含有B2)所述表达盒的重组载体； B5)含有B1)所述核酸分子的重组微生物； B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物； B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物； B8)含有B4)所述重组载体的重组微生物。 6.免疫磁珠，其特征在于：所述免疫磁珠的磁珠表面偶联有权利要求3或4所述的单链抗体或其抗原结合部分。 7.用于富集莱克多巴胺的产品，其特征在于：包括权利要求6所述的免疫磁珠。 8.用于检测或辅助检测莱克多巴胺或莱克多巴胺含量的产品，其特征在于：包括权利要求4或5所述的单链抗体或其抗原结合部分。 9.根据权利要求8所述的产品，其特征在于：还包括权利要求6所述的免疫磁珠。 10.权利要求3或4所述的单链抗体或其抗原结合部分、权利要求5所述的生物材料、权利要求6所述的免疫磁珠或权利要求7-9任一所述的产品在如下任一中的应用： (1)制备检测莱克多巴胺的产品； (2)检测莱克多巴胺； (3)制备检测莱克多巴胺含量的产品； (4)检测莱克多巴胺含量； (5)制备富集莱克多巴胺的产品； (6)富集莱克多巴胺。
所属类别：	发明专利