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原文传递一种金纳米簇及其在制备检测碱性磷酸酶荧光探针中的应用

专利名称：	一种金纳米簇及其在制备检测碱性磷酸酶荧光探针中的应用
摘要：	一种胞苷5′‑单磷酸保护的金纳米簇(AuNCs@CMP)及其在制备检测碱性磷酸酶荧光探针中的应用，属于荧光探针技术领域。本发明开发了一种胞苷5′‑单磷酸保护的新型金属纳米簇，作为碱性磷酸酶(ALP)的纳米底物，实现对其高灵敏检测。壳寡糖(COS)的引入显著放大了ALP水解产物的荧光信号，将检测限(LOD)提高到0.00026U·L‑1。该荧光探针亦成功地应用于人血清中碱性磷酸酶的测定(LOD＝0.00066U·L‑1)。因此，本发明开发的AuNCs@CMP纳米底物，将金纳米簇、聚合物和酶水解分析相结合，能够实现磷酸酶的高选择性、高灵敏度的直接检测，拓展了纳米簇在生物学中的应用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	吉林大学
发明人：	吴玉清;张春霞;李洪伟
专利状态：	有效
申请日期：	2021-12-09T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-18T00:00:00+0800
申请号：	CN202111517354.X
公开号：	CN114199844A
代理机构：	长春吉大专利代理有限责任公司
代理人：	刘世纯;王恩远
分类号：	G01N21/64;G;G01;G01N;G01N21;G01N21/64
申请人地址：	130012 吉林省长春市长春高新技术产业开发区前进大街2699号
主权项：	1.一种胞苷5′-单磷酸保护的金纳米簇，其特征在于：是基于水热法制备，将HAuCl4、胞苷5′-单磷酸(CMP)和柠檬酸钠(pH＝4.0～5.0)溶于蒸馏水得到混合溶液，溶液终体积为8～15mL，混合溶液中HAuCl4、CMP和柠檬酸钠的终浓度分别为0.8～1.2mM、2.8～3.2mM和20.0～30.0mM；然后在90～110℃下反应15～30min，反应结束后，将反应液冷却至室温：然后将上述制备的8～15mL反应液置于离心管中，向其中加入反应液体积1.5～3.0倍量的丙酮溶液振荡混合均匀，再将离心管以3000～5000转/分钟离心20～40分钟，最后收集沉淀并冷冻干燥过夜得到高红光发射的胞苷5′-单磷酸保护的金纳米簇。 2.权利要求1所述的胞苷5′-单磷酸保护的金纳米簇在制备检测碱性磷酸酶荧光探针中的应用。 3.如权利要求2所述的胞苷5′-单磷酸保护的金纳米簇在制备检测碱性磷酸酶荧光探针中的应用，其特征在于：用于溶液中痕量碱性磷酸酶的检测。 4.如权利要求3所述的胞苷5′-单磷酸保护的金纳米簇在制备检测碱性磷酸酶荧光探针中的应用，其特征在于：首先是将浓度为10U·L-1的ALP母液和浓度为1000μg·mL-1的AuNCs@CMP母液在PBS(10.0mM，pH7.4)缓冲液中混合，AuNCs@CMP的终浓度为100μg·mL-1，ALP的终浓度为0～0.50U·L-1；然后将以上混合溶液在37℃孵育20min，再加入壳寡糖(COS)，其终浓度为40μg·mL-1；混合均匀后在380nm激发下测量溶液在400～750nm范围内的荧光光谱，得到线性方程为y＝0.09499x+1.6508，R2＝0.9947，其中y为发射光谱485nm和570nm处荧光强度比值，x为ALP的浓度；最后利用该线性方程，通过测量溶液485nm和570nm处荧光强度比值，进而计算溶液中痕量ALP的浓度。 5.如权利要求2所述的胞苷5′-单磷酸保护的金纳米簇在制备检测碱性磷酸酶荧光探针中的应用，其特征在于：用于人血清中碱性磷酸酶的检测。 6.如权利要求5所述的胞苷5′-单磷酸保护的金纳米簇在制备检测碱性磷酸酶荧光探针中的应用，其特征在于：首先是将浓度为10％(v/v)的人血清白蛋白溶液在PBS(10.0mM，pH7.4)缓冲液中稀释得到人血清白蛋白浓度为5％(v/v)的PBS缓冲液，向其中加入浓度为100μg·mL-1的AuNCs@CMP；再加入终浓度为0～0.50U·L-1ALP；然后将以上混合溶液在37℃下孵育20min，在380nm激发下测量溶液在400～750nm范围内的荧光光谱，得到线性方程y＝0.08789x+1.5928，R2＝0.9974，其中y为溶液485nm和570nm处荧光强度比值，x为ALP的浓度；最后利用该线性方程，通过测量人血清485nm和570nm处荧光强度比值，进而计算人血清中ALP的浓度。
所属类别：	发明专利