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原文传递骨髓涂片小巨核细胞染色试剂盒、染色方法及应用

专利名称：	骨髓涂片小巨核细胞染色试剂盒、染色方法及应用
摘要：	本发明涉及骨髓涂片染色技术领域，具体涉及骨髓涂片小巨核细胞染色试剂盒、染色方法及应用。本发明提供的骨髓涂片小巨核细胞染色试剂盒包括一抗试剂、二抗试剂和染色剂，一抗试剂中包括CD41单克隆抗体、CD42b单克隆抗体或CD61单克隆抗体中至少一种，二抗试剂包括碱性磷酸酶标记的二抗聚合物，染色剂包括快红染色试剂和苏木素复染试剂。采用该试剂盒对骨髓细胞进行染色，染色结果表明，本发明提供的试剂盒染色特异性强，信号表达准确且清晰，无背景非特异染色问题，染色方法方便快捷。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	河南赛诺特生物技术有限公司
发明人：	邢雅南;李三华;米贯勋;张林姿;牛银银;齐华
专利状态：	有效
申请日期：	2022-10-17T00:00:00+0800
发布日期：	2023-01-17T00:00:00+0800
申请号：	CN202211271162.X
公开号：	CN115615786A
代理机构：	北京集佳知识产权代理有限公司
代理人：	温可睿
分类号：	G01N1/30;G01N1/31;G;G01;G01N;G01N1;G01N1/30;G01N1/31
申请人地址：	450000 河南省郑州市高新技术产业开发区翠竹街1号109号
主权项：	1.骨髓涂片小巨核细胞染色试剂盒，其特征在于，包括：一抗试剂、二抗试剂和染色剂；所述一抗试剂包括抗体和抗体稀释剂，所述抗体选自CD41单克隆抗体、CD42b单克隆抗体或CD61单克隆抗体中至少一种；所述二抗试剂包括碱性磷酸酶标记的二抗聚合物；所述染色剂包括快红染色试剂和苏木素复染试剂。 2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体稀释剂包含水、Tris-HCl、牛血清白蛋白、氯化钠、Tween-20、果绿色素和ProClin 950。 3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体稀释剂由水和6g/L Tris-HCl、15g/L牛血清白蛋白、8.5g/L氯化钠、0.1vol％的Tween-20、0.01wt％的果绿色素和0.15wt％ProClin 950组成，所述抗体稀释剂的pH为7.60±0.05。 4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述二抗试剂包含水、碱性磷酸酶标记的二抗聚合物、Tris、牛血清白蛋白、氯化钠、Tween-20、ProClin 950、酶保护剂和甘油，所述酶保护剂为金属离子，所述酶保护剂包括锌离子、镁离子、钙离子中的一种或多种混合物。 5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述二抗试剂由水和8～12μg/mL碱性磷酸酶标记的抗兔聚合物、6g/L Tris、10g/L牛血清白蛋白、8.5g/L氯化钠、3g/L Tween-20、0.1wt％的ProClin 950、0.1～1mM酶保护剂和40vol％的甘油，所述酶保护剂为金属离子，所述酶保护剂包括锌离子、镁离子、钙离子中的一种或多种混合物，所述二抗试剂的pH为7.20±0.05。 6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述快红染色试剂包括：快红显色剂、快红活化剂和快红缓冲液；所述快红显色剂包括芳伯胺类化合物和无机强酸，所述芳伯胺类化合物为碱性品红、新品红、3-氨基-4-甲氧基苯甲酰胺中的任意一种，所述无机强酸为盐酸、氢溴酸、氟硼酸、硫酸、硝酸中的任意一种；所述快红活化剂为亚硝酸钠溶液；所述快红缓冲液包括萘酚磷酸盐、Tris、氯化钠、MgCl2·6H2O、盐酸左旋咪唑、Tween-20、ProClin 950，所述萘酚磷酸盐为萘酚AS-TR磷酸酯、萘酚AS-TR磷酸二钠盐、萘酚AS-BI磷酸盐二钠盐水合物中的任意一种。 7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述快红染色试剂包括：快红显色剂、快红活化剂和快红缓冲液；所述快红显色剂包括20.0～40.0g/L芳伯胺类化合物和0.5～1M无机强酸，所述芳伯胺类化合物为碱性品红、新品红、3-氨基-4-甲氧基苯甲酰胺中的任意一种，所述无机强酸为盐酸、氢溴酸、氟硼酸、硫酸、硝酸中的任意一种；所述快红活化剂包括8.28～16.56g/L亚硝酸钠溶液；所述快红缓冲液包括2～3M萘酚磷酸盐、12.1g/L Tris、5.85g/L氯化钠、2.03g/LMgCl2·6H2O、0.24g/L盐酸左旋咪唑、0.3vol％的Tween-20、0.5wt％的ProClin 950，所述萘酚磷酸盐为萘酚AS-TR磷酸酯、萘酚AS-TR磷酸二钠盐、萘酚AS-BI磷酸盐二钠盐水合物中的任意一种；所述快红染色试剂中，所述快红显色剂、快红活化剂和快红缓冲液的体积比为1:1:20。 8.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述苏木素复染试剂包括5g/L苏木精、50g/L硫酸铝钾、0.5g/L碘酸钠和5vol％的甘油。 9.骨髓涂片小巨核细胞染色方法，其特征在于，采用权利要求1～8中任一项所述的试剂盒对细胞进行染色。 10.如权利要求9所述的染色方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、制备骨髓血涂片并固定；步骤2、采用所述一抗试剂孵育；步骤3、采用所述二抗试剂孵育；步骤4、采用所述快红染色试剂染色；步骤5、采用所述苏木素复染试剂复染。