详情

原文传递一种量子点荧光免疫层析法肿瘤标志物（G3BP）试剂盒及其检测方法

专利名称：	一种量子点荧光免疫层析法肿瘤标志物（G3BP）试剂盒及其检测方法
摘要：	本发明公开了一种量子点荧光免疫层析法肿瘤标志物(G3BP)试剂盒及其检测方法。本发明的定量检测G3BP荧光免疫层析方法是利用量子点的优良荧光特性，结合双色标记技术及免疫层析技术，在优化试纸条各组成部件基础上，实现的荧光定量检测。与常规胶体金免疫层析方法相比，本发明具有标记稳定性好、非特异性低、灵敏度高、线性范围宽以及定量准确的优势。本发明试剂盒对G3BP进行的定量检测，可同时检测全血、血清及血浆样品，适用于各级医院，特别有助于在基层医院及诊所的广泛推广。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江苏科兴诺生物技术有限公司
发明人：	温天文;张亚琼;巫军;张建业;袁学军;张旭雯
专利状态：	有效
申请日期：	2021-05-26T00:00:00+0800
发布日期：	2022-11-29T00:00:00+0800
申请号：	CN202110577317.1
公开号：	CN115407063A
分类号：	G01N33/574;G01N33/68;G01N33/58;G01N33/558;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/574;G01N33/68;G01N33/58;G01N33/558
申请人地址：	225316 江苏省泰州市泰州医药高新技术产业园第五期标准厂房G116栋3层东侧
主权项：	1.一种量子点荧光免疫层析法肿瘤标志物(G3BP)试剂盒及其检测方法，包括卡壳(12)、荧光免疫层析试纸条及缓冲液，其特征在于，所述卡壳(12)为荧光免疫层析试纸条的外部壳结构，包括上样孔(10)、视窗(11)、底板基垫(7)；所述荧光免疫层析试纸条包括样品垫(1)、标记垫(2)、层析膜(4)、吸水垫(5)、底板(6)和底板基垫(7)其中样品垫(1)、标记垫(2)、层析膜(4)和吸水垫(5)搭载于底板(6)之上，样品垫(1)位于上样孔(10)的下方，且连接于标记垫(2)，标记垫(2)连接于层析膜(4)，层析膜(4)上固定有两条质控带(9)和定量带(8)，且质控带(9)位于定量带(8)的两侧，层析膜(4)位于视窗(11)的下方，层析膜(4)连接于吸水垫(5)，底板基垫(7)位于底板(6)底部中上部(卡壳面视窗(11)方向端)；所述标记垫上固定有抗体修饰的量子点和质控分子修饰的量子点，所述抗体修饰的量子点按照以下方法制备：步骤1)静电吸引法或用化学交联或生物分子间特异性作用将肿瘤标志物(G3BP)的特异性抗体连接到量子点表面，得到抗体修饰的量子点，所述抗体修饰的量子点的发射波长范围为500～1500nm；步骤2)将步骤1)得到的抗体修饰的量子点固定在标记垫上，且标记垫上同时固定有质控分子修饰的量子点，所述质控分子修饰的量子点的发射波长与步骤1)得到的抗体修饰的量子点的发射波长不同，且波长范围为510～1500nm，在层析膜上分别设有定量带和质控带，其中质控带固定有能与所述质控分子特异性结合的生物分子，定量带固定有对应肿瘤标志物(G3BP)的与步骤1)所述特异性抗体不同抗原决定簇的特异性抗体；步骤3)以样品垫、标记垫、层析膜、吸水垫和底板构建成荧光免疫层析试纸条，其中所述层析膜为弱荧光层析膜，底板为弱或不含荧光特性；步骤4)试纸条免疫层析后，检测定量带和质控带的荧光信号强度，并以质控带荧光信号强度校正定量带的荧光信号强度，进而实现肿瘤标志物(G3BP)的定量检测。 2.根据权利要求1所述质控分子修饰的量子点的发射波长与步骤1)得到的抗体修饰的量子点的发射波长不同，且波长范围为500～1500nm，在层析膜上分别设有定量带和质控带，其中质控带固定有能与所述质控分子特异性结合的生物分子，定量带固定有对应肿瘤标志物(G3BP)的与步骤1)所述特异性抗体不同抗原决定簇的特异性抗体。 3.根据权利要求1、2所述的荧光免疫层析试剂盒及其检测方法，其特征在于，所述的量子点修饰标记方法有静电吸引法、常规交联剂连接法、生物素-亲和素法。 4.根据权利要求1、2、3所述的荧光免疫层析试剂盒及其检测方法，其特征在于，所述的常规交联剂连接法，是将抗体与量子点相偶联,其中，化学交联剂包括三乙烯基交联剂、N-乙烯基吡咯烷酮(NVP)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、异丙醇中的一种或一种以上的组合，其中优选采用三乙烯基交联剂、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)交联法对量子点进行蛋白修饰。 5.根据权利要求1、2、3所述的荧光免疫层析试剂盒及其检测方法，其特征在于，所述的静电吸引法、常规交联剂连接法、生物素-亲和素法，在本发明中，选用发射光波长为500～1500nm的量子点。 6.根据权利要求1～5，所述的荧光免疫层析试剂盒及其检测方法，其特征在于，所述的量子点修饰标记形成量子点的化合物是从硒化铕、碲化铕、硫化铕氯化铕、硒化锌(ZnSe)、磷化铟(InP)或砷化铟(InAs)组中选择一种或一种以上的组合。 7.根据权利要求1～6所述的荧光免疫层析试剂盒及其检测方法，其特征在于，所述的缓冲液为pH6.8～9.8的缓冲液，且该缓冲液可包含牛血清白蛋白、酪蛋白及表面活性剂，其中，表面活性剂可包括吐温20、吐温40、椰油基葡糖苷、月桂基葡糖苷、鲸蜡硬脂基葡糖苷、聚乙二醇中的一种或一种以上的组合，优选吐温20和pH8.6缓冲溶液。 8.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试剂盒及其检测方法，其特征在于，所述的底板基垫(7)，位于卡壳底部，具体位置在视窗(11)方向端超过卡壳正中间位置，使试剂条自上样孔(10)端到视窗(11)方向端与水平桌面形成由低到高的锐角坡度。 9.根据权利要求1、8所述的荧光免疫层析试剂盒及其检测方法，其特征在于，所述的底板基垫(7)尺寸、形状、颜色可以任意选择，优选宽度等于底板(6)宽度、长度1～10mm、高度1～10mm，优选颜色为白色、黑色。