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原文传递前蛋白转化酶枯草溶菌素9联合脂蛋白（a）胶体金快速检测试剂盒在冠心病诊断中的应用

专利名称：	前蛋白转化酶枯草溶菌素9联合脂蛋白（a）胶体金快速检测试剂盒在冠心病诊断中的应用
摘要：	本发明提供一种前蛋白转化酶枯草溶菌素9联合脂蛋白（a）胶体金快速检测试剂盒在冠心病诊断中的应用。所述前蛋白转化酶枯草溶菌素9联合脂蛋白（a）胶体金快速检测试剂盒在冠心病诊断中的应用包括以下步骤：1：设计并构建表达人PCSK9和Lp(a)蛋白的质粒，表达并纯化蛋白，注射小鼠腹腔得到对应抗体；2：纯化后的抗体，固定于反应垫，胶体金结合的抗体固定于结合垫。本发明提供的前蛋白转化酶枯草溶菌素9联合脂蛋白（a）胶体金快速检测试剂盒在冠心病诊断中的应用具有减轻患者经济负担、快速区分冠脉粥样硬化高危人群，及时干预预防治疗后血栓形成，提高患者预后生活质量的优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江大学医学院附属第一医院
发明人：	管晨;黄大伟;费明明;黄锡通;叶如剑;杨合慧
专利状态：	有效
申请日期：	2022-10-24T00:00:00+0800
发布日期：	2022-12-30T00:00:00+0800
申请号：	CN202211302134.X
公开号：	CN115541890A
代理机构：	山西木木三专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	颜思文
分类号：	G01N33/68;G01N33/92;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/532;G01N33/58;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68;G01N33/92;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/532;G01N33/58
申请人地址：	311100 浙江省杭州市余杭区文一西路1367号
主权项：	1.一种前蛋白转化酶枯草溶菌素9联合脂蛋白（a）胶体金快速检测试剂盒在冠心病诊断中的应用，其特征在于，包括以下步骤： S1：设计并构建表达人PCSK9和Lp(a)蛋白的质粒，并用大肠杆菌Rosetta2菌株表达； S2：通过蛋白纯化的方法得到人PCSK9和Lp(a)蛋白，并进行脱盐冻干； S3：使用PBS将PCSK9和Lp(a)蛋白融解，加入等体积弗氏完全佐剂进行乳化； S4：用乳化好的蛋白溶液注射到小鼠腹腔，得到含有抗体的腹水； S5：收集腹水，使用蛋白G微珠层析柱进行抗体纯化，得到小鼠抗PCSK9抗体和小鼠抗Lp(a)抗体； S6：胶体金溶液的pH值调节至9.0，按照不出现聚集现象的原则选择抗体浓度，对抗体进行胶体金标记； S7：在反应垫上分别固定鼠抗人PCSK9抗体、鼠抗人Lp(a)抗体和羊抗鼠IgG抗体，在结合垫上加入胶体金标记鼠抗人PCSK9抗体和胶体金标记鼠抗人Lp(a)抗体； S8：通过调节反应垫上固定的抗体含量，和/或结合垫中金标抗Lp(a)抗体的含量，将Lp(a)蛋白的检出限调整为30 mg/dL。 2.根据权利要求1所述的前蛋白转化酶枯草溶菌素9联合脂蛋白（a）胶体金快速检测试剂盒在冠心病诊断中的应用，其特征在于，检测时采用检测卡进行检测，所述检测卡包括塑料外壳和试纸条：试纸条结合垫中有胶体金标记抗PCSK9抗体和胶体金标记抗Lp(a)抗体，反应垫上固定抗PCSK9抗体、抗Lp(a)抗体和抗鼠IgG抗体；检测时，在样品垫中滴加待检血液和样品稀释液；血液中的PCSK9和Lp(a)随着液体向上与对应胶体金抗体结合，并持续向上移动，与对应抗体结合；当抗体移动至固定的抗体区域时，PCSK9与金标抗体的结合物与抗PCSK9抗体结合时，显示出红色条带；Lp(a)与金标抗体的结合物与抗Lp(a)抗体结合时，显示出红色条带；未结合对应蛋白的金标抗体与抗鼠IgG抗体结合，显示出红色条带，为质控条带，则判定为PCSK9阳性，Lp(a)阳性；若PCSK9和Lp(a)区域均未显现条带，质控区域显现红色条带，则判定为PCSK9阴性，Lp(a)阴性；若PCSK9显现条带，Lp(a)未显现条带，质控区域显现红色条带，则判定为PCSK9阳性，Lp(a)阴性；若PCSK9未显现条带，Lp(a)显现条带，质控区域显现红色条带，则判定为PCSK9阴性，Lp(a)阳性；若质控条带未显现，则本次检测无效。