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原文传递岩藻糖糖蛋白检测试剂盒、及其制备方法和岩藻糖糖蛋白显色方法

专利名称：	岩藻糖糖蛋白检测试剂盒、及其制备方法和岩藻糖糖蛋白显色方法
摘要：	本发明公开了一种岩藻糖糖蛋白检测试剂盒、及其制备方法和岩藻糖糖蛋白显色方法，首先将液体样本滴于试剂盒表面，通过进样池样本与试纸浸润，样本在横向流动力作用下，沿着亲水试纸向观测窗口流动，样本中含有α1,2‑岩藻糖的糖蛋白与凝集素1结合，其余样本继续流向下一层试纸，再将含有α1,3‑岩藻糖的糖蛋白与凝集素2结合，剩余样本流向第三层与含有α1,6‑岩藻糖的糖蛋白与凝集素3结合。所有结合的岩藻糖蛋白通过其抗体与凝集素生物素结合，采用辣根过氧化物酶标记显色，实现对样本中岩藻糖糖蛋白的定量检测。本方法对研究细胞和体液中定量不同连接岩藻糖糖蛋白在疾病中的变化等方面有着重要意义。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	苏州大学
发明人：	杨霜;杨泽人
专利状态：	有效
申请日期：	2022-09-15T00:00:00+0800
发布日期：	2023-01-17T00:00:00+0800
申请号：	CN202211120101.3
公开号：	CN115616209A
代理机构：	苏州翔远专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	叶丙静
分类号：	G01N33/535;G01N33/52;G01N33/68;G01N33/58;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/535;G01N33/52;G01N33/68;G01N33/58
申请人地址：	215137 江苏省苏州市相城区济学路8号
主权项：	1.一种岩藻糖糖蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括步骤： (1)选择含有纤维素的亲水材料作为亲水材料1号、亲水材料2号和亲水材料3号，所述亲水材料1号、亲水材料2号和亲水材料3号的长度依次递增，分别设定所述亲水材料1号、亲水材料2号和亲水材料3号的一端为凝集素结合区域； (2)将所述亲水材料1号、亲水材料2号和亲水材料3号的凝集素结合区域均浸于氧化液中，在室温反应1-2h，取出； (3)将所述亲水材料1号的凝集素结合区域浸入第一凝集素溶液中，将所述亲水材料2号的凝集素结合区域浸入第二凝集素溶液中，将所述亲水材料3号的凝集素结合区域浸入第三凝集素溶液中，均在室温条件下反应6-12h，分别获得第一凝集素结合材料、第二凝集素结合材料和第三凝集素结合材料； (4)将所述第一凝集素结合材料、第二凝集素结合材料和第三凝集素结合材料取出，清洗，并将三种凝集素结合材料在室温条件下真空干燥； (5)将所述第一凝集素结合材料、第二凝集素结合材料和第三凝集素结合材料的一端对齐，形成对齐端，并按从上往下排列的顺序将所述第一凝集素结合材料、第二凝集素结合材料和第三凝集素结合材料粘合，所述凝集素结合区域均外露，再在所述第三凝集素结合材料的底部贴合一层支撑底板，将固定材料贴合在所述支撑底板上，此时所述固定材料靠近所述凝集素结合区域； (6)在所述支撑底板的底部固定盒底板，将盒罩罩设于所述盒底板上，获得岩藻糖检测试剂盒，所述盒罩上开设有进样池和观察窗，所述进样池位于所述对齐端的上方，所述观察窗位于所述凝集素结合区域的上方。 2.根据权利要求1所述的一种岩藻糖糖蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述氧化液为10-20mM NaIO3溶于50-100mM CH3COONa缓冲溶液，pH＝4-6。 3.根据权利要求1所述的一种岩藻糖糖蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于：在步骤(3)中，所述第一凝集素溶液中的第一凝集素为UEA-I，PTL-II，LAA中的任意一种或多种；所述第二凝集素溶液中的第二凝集素为LTL；所述第三凝集素溶液中的第三凝集素为LCH、AAL中任意一种或两种。 4.根据权利要求1所述的一种岩藻糖检测试剂盒的制备方法，其特征在于：在步骤(4)中，所述清洗具体为用20-30％乙腈浸没清洗2-4次，再用去离子水清洗3-5次。 5.一种根据权利要求1-4任意一项所述的一种岩藻糖糖蛋白检测试剂盒的制备方法制得的岩藻糖糖蛋白检测试剂盒，其特征在于：包括盒罩和盒底板，所述盒罩和盒底板形成一个中空的容纳腔，在所述盒罩上开设有进样池和观察窗，在所述盒底板上固定有支撑底板，在所述支撑底板上从下往上依次固定有第三凝集素结合材料、第二凝集素结合材料和第一凝集素结合材料，所述第三凝集素结合材料、第二凝集素结合材料和第一凝集素结合材料的一端对齐，形成对齐端，并且位于所述进样池的下方，所述第三凝集素结合材料、第二凝集素结合材料和第一凝集素结合材料的另一端依次递减呈阶梯形，使得凝集素结合区域位于所述观察窗的下方。 6.根据权利要求5所述的一种岩藻糖糖蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述第三凝集素结合材料、第二凝集素结合材料和第一凝集素结合材料的厚度均为0.5-1.0毫米，所述第三凝集素结合材料、第二凝集素结合材料和第一凝集素结合材料的长度依次按照5-10毫米递减。 7.一种使用如权利要求5或6所述的岩藻糖糖蛋白检测试剂盒的岩藻糖糖蛋白显色方法，其特征在于，包括： (1)在室温条件下将样本与岩藻糖糖蛋白抗体、凝集素生物素和HRP充分混合获得混合样本； (2)将所述混合样本滴入进样池中，所述混合样本与所述亲水材料1号接触，通过横向流动到达观察窗下的显色区域，并与第一凝集素结合材料的凝集素结合区域反应，当所述混合样本中具有α1,2岩藻糖蛋白时，α1,2岩藻糖蛋白与第一凝集素结合，所述混合样本中的抗体-凝集素生物素-HRP显色，形成第一个条带，当所述混合样本中没有α1,2岩藻糖蛋白时，所述混合样本中的抗体-凝集素生物素-HRP不显色； (3)所述混合样本向下流动，使得所述混合样本与所述亲水材料2号接触，通过横向流动到达所述观察窗下的显色区域，并与第二凝集素结合材料的凝集素结合区域反应，当所述混合样本中具有α1,3岩藻糖蛋白时，α1,3岩藻糖蛋白与第二凝集素结合，所述混合样本中的抗体-凝集素生物素-HRP显色，形成第二个条带，当所述混合样本中没有α1,3岩藻糖蛋白时，所述混合样本中的抗体-凝集素生物素-HRP不显色； (4)所述混合样本继续向下流动，使得所述混合样本与所述亲水材料3号接触，通过横向流动到达观察窗下的显色区域，并与第三凝集素结合材料的凝集素结合区域反应，当所述混合样本中具有α1,6岩藻糖蛋白时，α1,6岩藻糖蛋白与第三凝集素结合，所述混合样本中的抗体-凝集素生物素-HRP显色，形成第三个条带，当所述混合样本中没有α1,6岩藻糖蛋白时，所述混合样本中的抗体-凝集素生物素-HRP不显色； (5)静置10-15分钟，形成稳定的三条带结果，通过显色强度定性定量所述样本中所含岩藻糖糖蛋白的种类和丰度。 8.根据权利要求7所述的岩藻糖糖蛋白显色方法，其特征在于，在步骤(1)之后，步骤(2)之前还包括：向所述混合样本中加入试剂，将所述混合样本与所述试剂在室温条件下孵育5-15分钟，其中，所述试剂的制备方法为：将DAB溶于1×PBS缓冲液，所述DAB的重量百分比为0.03-0.05％，再加入重量百分比为1.0-1.2％的CoCl2。