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原文传递温经汤方中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的检测方法及其用途

专利名称：	温经汤方中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的检测方法及其用途
摘要：	本发明涉及药物检测技术领域，具体涉及温经汤方中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的检测方法及其用途。本发明提供的温经汤方中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的检测方法，在制备供试品溶液的过程中，在碱洗所得的第三中间液中加入酸性溶液以调节第三中间液的pH值，避免因经过碱洗的供试品溶液的pH值过高而导致色谱柱的耐用性差、柱效过快降低、频换更换，因此，本发明的方法能够显著提升色谱柱的耐用性，降低色谱柱的柱效下降速率，进而降低色谱柱的更换频率。
专利类型：	发明专利
申请人：	华润三九医药股份有限公司;深圳市中药制造业创新中心有限公司
发明人：	王亮;周宇;陈威;周琪;陈艳萍;吴晓敏;陈世彬;孙楠;马鹏岗
专利状态：	有效
申请日期：	2022-09-22T00:00:00+0800
发布日期：	2022-12-06T00:00:00+0800
申请号：	CN202211161638.4
公开号：	CN115436524A
代理机构：	北京三聚阳光知识产权代理有限公司
代理人：	廖慧敏
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34
申请人地址：	518110 广东省深圳市龙华区观湖街道观澜高新园区观清路1号;
主权项：	1.一种温经汤方中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法进行检测，检测时所采用的供试品溶液的制备过程包括： 1)取供试品，利用醇类溶剂提取，提取液蒸干，得第一残渣； 2)加水溶解所述第一残渣，所得残渣水溶液利用低极性有机溶剂进行第一萃取，取水层，得第一中间液； 3)利用水饱和的正丁醇溶液对所述第一中间液进行第二萃取，取正丁醇层，得第二中间液； 4)利用强碱溶液对所述第二中间液进行洗涤，取正丁醇层，得第三中间液； 5)向所述第三中间液中加入酸性溶液，蒸干，所得第二残渣加醇类溶剂溶解。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述醇类溶剂选自甲醇、乙醇、体积百分比不低于70％的甲醇水溶液、和体积百分比不低于70％的乙醇水溶液中的至少一种；可选的，操作1)中，所述提取为超声提取，相对于1g的所述供试品，所述醇类溶剂的用量为25～200mL；可选的，操作2)中加水溶解所述第一残渣时，水与所述第一残渣对应的所述提取液的体积比为1:(1～3)。 3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，操作2)中所述第一萃取的次数为1～3次，单次第一萃取时，所述低极性有机溶剂与所述残渣水溶液的体积比为1:(1～3)；可选的，所述第一萃取为摇床振摇萃取，单次第一萃取的时间为1～4min；可选的，所述低极性有机溶剂选自乙醚、氯仿和石油醚中的至少一种。 4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，操作3)中所述第二萃取的次数为2～4次，单次第二萃取时，所述水饱和的正丁醇溶液与所述第一中间液的体积比为(1～3):1；可选的，所述第二萃取为摇床振摇萃取，单次第二萃取的时间为1～4min。 5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，操作4)中在利用强碱溶液对所述第二中间液进行洗涤时，洗涤次数为1～4次，单次洗涤时，所述强碱溶液与所述第二中间液的体积比为1:(1～3)；可选的，所述强碱溶液为氢氧化钠溶液和/或氢氧化钾溶液；所述强碱溶液中，强碱的质量分数为0.1％～5％。 6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，操作4)中利用强碱溶液对所述第二中间液进行洗涤后，所述检测方法还包括：取强碱溶液层，利用水饱和的正丁醇溶液进行第三萃取，取正丁醇层，与所述第二萃取的正丁醇层合并，得所述第三中间液；可选的，所述第三萃取的次数为1～3次，单次第三萃取时，所述水饱和的正丁醇溶液与所述强碱溶液层的体积比为1:(1～3)。 7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，操作5)中向所述第三中间液中加入酸性溶液，调节所述第三中间液的pH值为7.5～10；可选的，所述酸性溶液选自冰醋酸溶液和/或甲酸溶液；所述酸性溶液中，酸的质量分数为0.1～5％％。 8.根据权利要求1～7中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的检测条件包括如下条件中的至少一项： (1)色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，柱长为150mm，内径为4.6mm，粒径为2.7μm；色谱柱优选为CAPCELL CORE C18柱； (2)以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱程序包括：0～21min，流动相中乙腈的体积百分比为18％；21～30min，流动相中乙腈的体积百分比为18％→20％；30～35min，流动相中乙腈的体积百分比为20％；35～40min，流动相中乙腈的体积百分比为20％→28％；40～56min，流动相中乙腈的体积百分比为28％→29％；56～60min，流动相中乙腈的体积百分比为29％； (3)柱温为25～35℃； (4)流速为0.5～1.0mL/min； (5)检测波长为200～210nm； (6)进样量为2～10μl。 9.根据权利要求1～7中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述供试品包括温经汤复方制剂的成品、温经汤复方制剂的中间品或者温经汤方的基准样品，所述温经汤复方制剂包括温经汤颗粒；可选的，所述温经汤方包括如下重量份的原料： 1～2重量份当归、1～2重量份川芎、1～2重量份芍药、1～2重量份桂心、1～2重量份牡丹皮、1～2重量份莪术、1～2重量份人参、1～2重量份甘草、1～2重量份牛膝。 10.权利要求1～9中任一项所述的检测方法在温经汤复方制剂质量控制中的用途。