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原文传递一种基于LC-MS/MS测定人血浆或脑脊液中奥雷巴替尼浓度的方法和试剂盒

专利名称：	一种基于LC-MS/MS测定人血浆或脑脊液中奥雷巴替尼浓度的方法和试剂盒
摘要：	本发明公开了一种基于LC‑MS/MS测定人血浆或脑脊液中奥雷巴替尼浓度的方法和试剂盒；该方法首先配制不同浓度的奥雷巴替尼标准曲线工作液和不同浓度的奥雷巴替尼质控工作液；然后配置内标工作液；最后向待测样品中加入内标工作液，涡旋混合，再进行预处理得到上清液，取上清液注入LC‑MS/MS仪中进行检测分析。本发明不仅预处理简单、成本低廉、分析时间短、特异性好，而且检测方法的灵敏度高，定量下限可达到皮克级水平，在其他LC‑MS/MS检测方法中少见。本方法可用于奥雷巴替尼的药动学‑药效学研究及常规临床患者血浆和脑脊液中奥雷巴替尼的浓度测定。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	华中科技大学同济医学院附属同济医院
发明人：	贡雪芃;向东;刘东;王珏;曹阳;刘璐;余恒毅;李喜平;赵婷慧;余秋霞;李宁红
专利状态：	有效
申请日期：	2022-10-28T00:00:00+0800
发布日期：	2023-01-31T00:00:00+0800
申请号：	CN202211335168.9
公开号：	CN115656373A
代理机构：	武汉开元知识产权代理有限公司
代理人：	冯超
分类号：	G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/86;G01N30/04;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/86;G01N30/04
申请人地址：	430030 湖北省武汉市解放大道1095号
主权项：	1.一种基于LC-MS/MS测定人血浆或脑脊液中奥雷巴替尼浓度的方法，其特征在于：包括以下步骤： 1)配制不同浓度的奥雷巴替尼标准曲线工作液和不同浓度的奥雷巴替尼质控工作液； 2)配置内标工作液； 3)向待测样品中加入内标工作液，涡旋混合，再进行预处理得到上清液，取上清液注入LC-MS/MS仪中进行检测分析。 2.根据权利要求1所述基于LC-MS/MS测定人血浆或脑脊液中奥雷巴替尼浓度的方法，其特征在于：所述步骤2)中，内标为氯氮平、氘代伊马替尼和氘代奥雷巴替尼中任意一种。 3.根据权利要求2所述基于LC-MS/MS测定人血浆和脑脊液中奥雷巴替尼浓度的方法，其特征在于：所述待测样品为待测血浆样品或待测脑脊液样品。 4.根据权利要求3所述基于LC-MS/MS测定人血浆和脑脊液中奥雷巴替尼浓度的方法，其特征在于：所述待测血浆样品预处理步骤为：向待测血浆样品中加入内标工作液，涡旋混合，再加入甲基叔丁基醚涡旋；然后低温高速离心，取上层有机溶剂氮气吹干，再使用复溶液复溶，涡旋混匀，低温高速离心得到上清液；其中，甲基叔丁基醚体积是待测血浆样品的5～20倍；或者，所述待测脑脊液样品预处理步骤为：向待测脑脊液样品中加入内标工作液，涡旋混合，然后低温高速离心，取上层有机溶剂氮气吹干，再使用复溶液复溶，涡旋混匀，低温高速离心得到上清液，内标工作液的体积是待测脑脊液样品的2～10倍。 5.根据权利要求4所述基于LC-MS/MS测定人血浆和脑脊液中奥雷巴替尼浓度的方法，其特征在于：所述内标为伊马替尼氘代d8；且待测血浆样品预处理时，内标工作液以甲醇稀释，浓度为20ng/mL；或者，所述内标为伊马替尼氘代d8；待测脑脊液样品预处理时，内标工作液以甲醇稀释，浓度为70pg/mL。 6.根据权利要求4所述基于LC-MS/MS测定人血浆和脑脊液中奥雷巴替尼浓度的方法，其特征在于：所述复溶液为甲醇或乙腈与水按体积比50:50～90:10混合而成。 7.根据权利要求1所述基于LC-MS/MS测定人血浆和脑脊液中奥雷巴替尼浓度的方法，其特征在于：所述LC-MS/MS仪的色谱条件为：以通用型C18硅胶柱为色谱柱，流动相A为含甲酸铵的水溶液或者含乙酸铵的水溶液或者浓度为0.5％的氨水；流动相B为甲醇、乙腈、甲醇和乙腈的混合溶剂或甲醇、乙腈和异丙醇的混合溶剂；采用梯度洗脱法或等度洗脱法进行样品分离。 8.根据权利要求7所述基于LC-MS/MS测定人血浆和脑脊液中奥雷巴替尼浓度的方法，其特征在于：所述流动相A为含甲酸铵的水溶液时，含甲酸铵的水溶液浓度为5-20mM；所述流动相B为甲醇和乙腈的混合溶剂时，甲醇和乙腈的体积比为10:90-90:10。 9.根据权利要求7所述基于LC-MS/MS测定人血浆和脑脊液中奥雷巴替尼浓度的方法，其特征在于：所述待测血浆样品的梯度洗脱程序为：0～0.5min，10％B相；0.5～2.0min，10～20％B相；2.0～3.5min，20～60％B相；3.5～5.0min，60～85％B相；5.0～6.5min，85～88％B相；6.5～6.6min，88～95％B相；6.6～7.50min，95％B相；7.50～7.51min，95～10％B相；7.51～8.50min 10％B相；或者，所述待测脑脊液样品的梯度洗脱程序为：0～0.5min，30％B相；0.5～1.0min，30～65％B相；1.0～2.5min，65～80％B相；2.5～2.6 min，80～95％B相；2.6～3.4min，95％B相；3.40～3.41min，95～30％B相；3.41～4.0min 30％B相。 10.一种测定人血浆或脑脊液中奥雷巴替尼浓度的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括不同浓度的奥雷巴替尼标准曲线工作液、不同浓度的奥雷巴替尼质控工作液和内标工作液。