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原文传递一种猴耳组织制片方法及猴耳组织切片

专利名称：	一种猴耳组织制片方法及猴耳组织切片
摘要：	本发明公开了一种猴耳组织制片方法及猴耳组织切片。所述猴耳组织制片方法包括如下步骤：猴头颅组织的预处理，猴耳组织的获取、固定、脱钙、修样以及后处理；其中，猴头颅组织的预处理包括对猴头颅组织进行动脉灌流固定。本发明的猴耳组织制片方法所制得的猴耳组织切片可及时对猴耳组织进行固定，固定效果良好，且各部分猴耳组织形态结构保持完整。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	益诺思生物技术南通有限公司
发明人：	李华;张亚群;钱庄;朱笑天;仪泽文;张婧雯;缪成贤;王绮绮;刘军;杨登文;王清晓
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-14T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-14T00:00:00+0800
申请号：	CN202311026598.7
公开号：	CN117054189A
代理机构：	上海弼升知识产权代理有限公司
代理人：	蔡立丰
分类号：	G01N1/28;G01N1/34;G01N1/36;G01N1/30;A61B10/02;G;A;G01;A61;G01N;A61B;G01N1;A61B10;G01N1/28;G01N1/34;G01N1/36;G01N1/30;A61B10/02
申请人地址：	226133 江苏省南通市海门区临江镇洞庭湖路100号A18楼
主权项：	1.一种猴耳组织制片方法，其特征在于，其包括如下步骤：猴头颅组织的预处理，猴耳组织的获取、固定、脱钙、修样以及后处理；其中，所述猴头颅组织的预处理包括对所述猴头颅组织进行动脉灌流固定。 2.如权利要求1所述的猴耳组织制片方法，其特征在于，所述猴耳组织为食蟹猴或恒河猴的耳组织；和/或，所述动脉灌流固定包括获取所述猴头颅组织后，从左右侧颈总动脉灌注固定液；所述固定液较佳地为Bouin氏固定液；和/或，所述动脉灌流固定的时间为8-10min。 3.如权利要求1所述的猴耳组织制片方法，其特征在于，所述修样包括沿第一包埋面以及第二包埋面切取猴耳组织，并去除骨表面的结缔组织；较佳地，沿耳道管后缘与颈动脉管外孔中心点之间连线切取即得所述第一包埋面，再沿耳道管中心线切取即得所述第二包埋面。 4.如权利要求1所述的猴耳组织制片方法，其特征在于，所述脱钙包括预脱钙以及二次脱钙；较佳地，所述预脱钙包括以快速脱钙液进行处理；所述快速脱钙液较佳地包括盐酸、甲酸、冰醋酸、水杨酸和蒸馏水，更佳地由质量浓度为36％-38％的浓盐酸6mL、质量浓度为30％的甲酸6mL、冰醋酸8mL、水杨酸10g、蒸馏水80mL混合而得；所述快速脱钙液的体积较佳地为所述猴耳组织总体积的10-12倍；较佳地，所述预脱钙的时间为20-40min，例如30min；较佳地，所述二次脱钙包括以EDTA脱钙液进行处理；所述EDTA脱钙液较佳地包括0.1-0.2M EDTA和10％中性福尔马林；所述EDTA脱钙液的体积较佳地为猴耳组织总体积的10-12倍；较佳地，所述二次脱钙的时间为12-24h，例如12h。 5.如权利要求1所述的猴耳组织制片方法，其特征在于，所述固定包括预固定和二次固定；较佳地，所述预固定包括以Bouin氏固定液进行固定；所述Bouin氏固定液体积较佳地为猴耳组织体积的8-10倍；较佳地，所述预固定的时间为12-24h，例如24h；较佳地，所述预固定为振荡固定；更佳地为摇床中持续振荡固定；所述摇床的转速较佳地为60-80转/分钟，例如60转/分钟；较佳地，所述二次固定包括以福尔马林溶液进行固定；所述福尔马林溶液较佳地为中性福尔马林溶液；所述福尔马林溶液的体积较佳地为猴耳组织体积的8-10倍；较佳地，所述二次固定的时间为12-24h，例如12h。 6.如权利要求1所述的耳组织制片方法，其特征在于，所述动脉灌流固定前还包括猴头颅组织中血管的灌洗；较佳地，所述灌洗包括以生理盐水进行灌洗；更佳地包括以添加有5-10IU/mL肝素钠的生理盐水进行灌洗；较佳地，所述灌洗的时间为5-10s，例如10s。 7.如权利要求1所述的猴耳组织制片方法，其特征在于，所述后处理包括依次脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、烘片、染色和封片。 8.如权利要求7所述的猴耳组织制片方法，其特征在于，所述脱水为乙醇脱水，较佳地为梯度浓度乙醇脱水；所述梯度浓度乙醇脱水较佳地包括依次进行：70％乙醇处理60min，80％乙醇处理60min，95％乙醇处理60min，95％乙醇处理60min，无水乙醇处理45min，无水乙醇处理45min，无水乙醇处理45min；和/或，所述透明为二甲苯透明；所述二甲苯透明较佳地连续进行两次，每次二甲苯透明的时间例如为60min；和/或，所述浸蜡为石蜡浸渍；所述石蜡浸渍较佳地连续进行三次，每次石蜡浸渍的时间例如为60min；和/或，所述脱水、透明和浸蜡在组织脱水机中依次进行；较佳地，所述脱水前还包括固定液的去除，例如流水冲洗进行固定液的去除。 9.如权利要求7所述的猴耳组织制片方法，其特征在于，所述包埋为石蜡包埋；所述石蜡包埋的温度较佳地为60℃-65℃，例如65℃；和/或，所述切片的厚度为3-5μm，较佳地为3μm；和/或，所述烘片的温度为40-45℃，例如42℃；和/或，所述烘片的时间为2-12h，例如6h；和/或，所述染色采用HE染色方式进行；和/或，所述封片采用自动封片方式进行；较佳地，所述染色和封片采用染色封片一体机进行。 10.一种猴耳组织切片，其采用如权利要求1-9任意一项所述的猴耳组织制片方法制得。