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原文传递一种抗髓过氧化物酶抗体测定试剂盒及其制备方法和应用

专利名称：	一种抗髓过氧化物酶抗体测定试剂盒及其制备方法和应用
摘要：	本发明公开了一种抗髓过氧化物酶(MPO)抗体测定试剂盒，包括R1磁珠包被物工作液、R3MPO反应缓冲液、R2碱性磷酸酶标记物工作液、校准品。所述R1磁珠包被工作液包括髓过氧化物酶抗原‑磁珠包被物；所述磁珠与髓过氧化物酶抗原的包被比例为磁珠：髓过氧化物酶抗原＝1mg：(1‑4)μg。本发明的一种抗髓过氧化物酶抗体测定试剂盒采用磁珠包被髓过氧化物酶抗原，实现对目标分子的特异性捕获，令抗髓过氧化物酶抗体试剂盒灵敏度更高，可以检测到较低浓度的目标分子，且结果更加准确；本发明还公开了该试剂盒的制备方法和非诊断性检测方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广东埃纳生医学科技有限公司
发明人：	周强;冯俊博;周子明;陈顺俊
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-30T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-10T00:00:00+0800
申请号：	CN202311103692.8
公开号：	CN117031041A
代理机构：	广州哲力智享知识产权代理有限公司
代理人：	李思纬
分类号：	G01N33/68;G01N33/535;G01N33/543;G01N33/58;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68;G01N33/535;G01N33/543;G01N33/58
申请人地址：	517000 广东省河源市江东新区产业园起步区纬三路北侧,经六北路西侧
主权项：	1.一种抗髓过氧化物酶抗体测定试剂盒，其特征在于，包括R1磁珠包被物工作液和R2碱性磷酸酶标记物工作液；所述R1磁珠包被物工作液中抗原浓度为0.1-1.2μg/mL。 2.如权利要求1所述一种抗髓过氧化物酶抗体测定试剂盒，其特征在于，所述R1磁珠包被物工作液含有髓过氧化物酶抗原-磁珠包被物，浓度为0.1-0.3mg/mL；所述R1磁珠包被工作液含髓过氧化物酶抗原-磁珠包被物；所述磁珠与髓过氧化物酶抗原的包被质量比为1：(0.001-0.004)。 3.如权利要求1所述一种抗髓过氧化物酶抗体测定试剂盒，特征在于，所述R2碱性磷酸酶标记物工作液包括羊抗人IgG抗体-碱性磷酸酶标记物；所述R2碱性磷酸酶标记物工作液中羊抗人IgG抗体-碱性磷酸酶标记物浓度为0.5-2.0μg/mL。 4.如权利要求1所述一种抗髓过氧化物酶抗体测定试剂盒，特征在于，所述抗髓过氧化物酶抗体测定试剂盒还包括R3 MPO反应缓冲液校准品、校准品复融液、化学发光底物液和MPO反应缓冲液；所述R3 MPO反应缓冲液为PBS溶液、Hepes溶液和Tris溶液中的至少一种，且所述MPO反应缓冲液中包括以质量百分比计：0.8-1.5％BSA、0.08-0.15％Tween 20、0.3-0.8％Proclin 300，所述MPO反应缓冲液的浓度为0.03-0.08M，pH值为7.1-7.3。 5.权利要求1-4任一项所述的一种抗髓过氧化物酶抗体测定试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、将磁珠和髓过氧化物酶抗原进行包被结合，封闭清洗后在加入磁珠包被物稀释液，得到R1磁珠包被物工作液； S2、将碱性磷酸酶和羊抗人IgG抗体碱性磷酸酶标记结合并超滤纯化，然后加入碱性磷酸酶标记物稀释液进行稀释，稀释得到R2碱性磷酸酶标记物工作液； S3、将所述R1磁珠包被物工作液、R2碱性磷酸酶标记物工作液、R3 MPO反应缓冲液、化学发光底物液、校准品和校准品复融液进行组装，得到抗髓过氧化物酶测定试剂盒。 6.如权利要求5所述一种抗髓过氧化物酶抗体测定试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述磁珠和髓过氧化物酶抗原包被时间为1-6h；结合缓冲液为0.05-0.15M MES缓冲液，pH为5.0-6.0；磁珠和封闭液的比例为磁珠：封闭液＝1mg：(0.05-0.2)mL；所述封闭液为1-3％BSA溶液，所述封闭时间为0.5-2h。 7.如权利要求5所述一种抗髓过氧化物酶抗体测定试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述碱性磷酸酶结合缓冲液pH为6.5-7.3，所述碱性磷酸酶和羊抗人IgG抗体碱性磷酸酶标记结合时间为30-120min；所述超滤次数为4-8次；所述羊抗人IgG抗体和碱性磷酸酶结合的质量比为1：(0.5-5)；所述碱性磷酸酶标记物稀释液为MES溶液、Tris溶液和TES溶液中的一种，且所述碱性磷酸酶标记物稀释液中包括以质量百分比计：0.8-1.5％BSA、0.08-0.15％Tween 20、0.3-0.8％Proclin 300，所述碱性磷酸酶标记物稀释液浓度为0.03-0.08M，pH值为6.4-7.6。 8.如权利要求5所述的一种抗髓过氧化物酶抗体测定试剂盒的制备方法，其特征在于，还包括校准品的冻干处理步骤，所述冻干处理步骤的冻干程序如下：冷冻阶段：冷冻温度-60～-40℃，持续10-12h，然后以4-6℃/h的速率升温至主干燥阶段；主干燥阶段：冷冻温度-35～-0℃，持续10-15h，然后以0.7-10℃/h的速率升温至次干燥阶段；次干燥阶段：冷冻温度0～20℃，持续1-4h，然后以3-10℃/h的速率升温至完全干燥阶段；完全干燥阶段：冷冻温度25～30℃，持续2-5h。 9.权利要求1-4任一项所述的一种非诊断和治疗目的抗髓过氧化物酶抗体测定试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、将待测样品稀释后与R1磁珠包被物工作液、R3 MPO反应缓冲液进行孵育结合，第一次洗涤后加入R2碱性磷酸酶标记物工作液进行标记结合，磁分离并进行第二次洗涤，得到抗髓过氧化物酶抗体免疫复合物；步骤2、将所述抗髓过氧化物酶抗体免疫复合物加入化学发光底物液中反应，检测RLU发光值；步骤3、将RLU发光值与校准品构建的发光值标准曲线进行匹配，得到待测样本中的抗髓过氧化物酶抗体的含量。 10.如权利要求9所述的一种非诊断和治疗目的抗髓过氧化物酶抗体测定试剂盒的检测方法，其特征在于，所述待测样品的稀释倍数为10-60倍；所述稀释后的待测样品、R1磁珠包被物工作液、R2碱性磷酸酶标记物工作液、MPO反应缓冲液、化学发光底物液的加入体积比为(20-100)：(20-70)：(20-100)：(20-70)：(100-300)；所述步骤1中，孵育结合时间为5-15min，第一次洗涤次数为1-5次；标记结合时间为2.5-10min，第二次洗涤次数为1-5次；所述步骤2中，底物反应时间为2.5-10min。