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原文传递一种B因子检测试剂盒

专利名称：	一种B因子检测试剂盒
摘要：	本发明涉及化学分析技术领域，具体涉及一种B因子检测试剂，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括缓冲液一和增敏剂；所述试剂R2包括缓冲液二和兔抗人B因子多克隆抗体包被的胶乳颗粒；所述增敏剂的制备方法为：取琥珀酸二仲辛酯磺酸钠加入到水中，完全溶解后加入三异丙醇胺聚氧丙烯聚氧乙烯醚、LiCl、CaCl2、NaCl、氯化胆碱，完全溶解后再加入聚乙二醇6000(PEG6000)、聚乙二醇10000(PEG10000)，搅拌至完全溶解；所述兔抗人B因子多克隆抗体包被的胶乳颗粒的制备方法为：取85nm羧基胶乳颗粒、128nm羧基胶乳颗粒和210nm羧基胶乳颗粒混匀，加入缓冲液、EDCI，混匀后室温25℃下加入兔抗人B因子多克隆抗体60‑100mg，混匀后加入封闭剂制得。本发明稳定性、灵敏度和抗干扰能力强。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东博科生物产业有限公司
发明人：	李志明;谢清华;周东;董雯
专利状态：	有效
申请日期：	2023-07-13T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-17T00:00:00+0800
申请号：	CN202310858678.2
公开号：	CN117074689A
分类号：	G01N33/68;G01N33/531;G01N33/53;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68;G01N33/531;G01N33/53
申请人地址：	250000 山东省济南市章丘区明水经济开发区(经十东路与明埠路交界山东博科产业园)
主权项：	1.一种B因子检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，其特征在于，所述试剂R1包括缓冲液一和增敏剂；所述试剂R2包括缓冲液二和兔抗人B因子多克隆抗体包被的胶乳颗粒；所述增敏剂的制备方法为：取琥珀酸二仲辛酯磺酸钠加入到水中，完全溶解后加入三异丙醇胺聚氧丙烯聚氧乙烯醚、LiCl、CaCl2、NaCl、氯化胆碱，完全溶解后再加入聚乙二醇6000、聚乙二醇10000，搅拌至完全溶解；所述兔抗人B因子多克隆抗体包被的胶乳颗粒的制备方法为：取85nm羧基胶乳颗粒、128nm羧基胶乳颗粒和210nm羧基胶乳颗粒混匀，加入缓冲液、EDCI，混匀后室温25℃下加入兔抗人B因子多克隆抗体60-100mg，混匀后加入封闭剂，制得所述兔抗人B因子多克隆抗体包被的胶乳颗粒。 2.根据权利要求1所述的一种B因子检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1还包括抗干扰剂，所述抗干扰剂的制备方法为：取N-十八烷基-N-(2-磺酸基)丙基-N，N-二甲基甜菜碱加入水中，完全溶解后加入BSA、阻断剂、氯化钙、亚铁氰化钾，搅拌至完全溶解。 3.根据权利要求2所述的一种B因子检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2还包括稳定剂，所述稳定剂的制备方法为：取酪蛋白、明胶、黄原胶加入到水中，完全溶解后加入烷基酚聚氧乙烯醚磷酸单酯铵盐和山梨糖醇，搅拌至完全溶解。 4.根据权利要求3所述的一种B因子检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液一为25℃，pH为6.86的CHES-TAPSO-MES缓冲液，所述CHES-TAPSO-MES缓冲液的制备方法为：称取CHES(2-环己胺基乙磺酸)2.07g，用900ml水全溶解后，加入CAPSO(3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸)2.37g，MES(4-吗啉乙磺酸)2.13g，搅拌溶解后，用适量氢氧化钠或盐酸调节pH至6.86。 5.根据权利要求4所述的一种B因子检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液二为25℃，pH为7.25的CHES-TAPSO-MES缓冲液，所述CHES-TAPSO-MES缓冲液的制备方法为：称取CHES(2-环己胺基乙磺酸)2.07g，用900ml水全溶解后，加入CAPSO(3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸)2.37g，MES(4-吗啉乙磺酸)2.13g，搅拌溶解后，用适量氢氧化钠或盐酸调节pH至7.25。 6.根据权利要求1所述的一种B因子检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1还包括防腐剂一，所述防腐剂为叠氮钠、P300、5-溴-5-硝基-1,3-二恶烷中的一种；所述试剂R2还包括防腐剂二，所述防腐剂二为叠氮钠、P300、5-溴-5-硝基-1,3-二恶烷中的一种。 7.根据权利要求5所述的一种B因子检测试剂盒，其特征在于，所述增敏剂的制备方法为：取5g琥珀酸二仲辛酯磺酸钠加入到300ml水中，25℃搅拌30min；完全溶解后，加入8g三异丙醇胺聚氧丙烯聚氧乙烯醚、10gLiCl、3gCaCl2、6gNaCl、8g氯化胆碱，45℃搅拌120min；完全溶解后，加入5g聚乙二醇6000(PEG6000)、10g聚乙二醇10000(PEG10000)，37℃搅拌60min；完全溶解后，用水定容至500ml；所述兔抗人B因子多克隆抗体包被的胶乳颗粒的制备方法为：取85nm羧基胶乳颗粒1.8ml、128nm羧基胶乳颗粒1ml、210nm羧基胶乳颗粒1.2ml，混匀后，加入16ml10mmoL/L的CHES-TAPSO-MES复合缓冲液(pH值为7.25，25℃)，搅拌混匀，40℃振荡30min(转速120r/min)；然后加入10-50mgEDC，40℃振荡1h(转速180r/min)；降至室温25℃，加入兔抗人B因子多克隆抗体60-100mg，25℃振荡4h(转速210r/min)，加入5ml复合封闭剂(5g/L乙醇胺、10g/LBSA、20g/L甘露醇、1g/LTween20),25℃振荡12h(转速160r/min)得到所述兔抗人B因子多克隆抗体包被的胶乳颗粒的溶液。 8.根据权利要求7所述的一种B因子检测试剂盒，其特征在于，所述抗干扰剂的制备方法为：取12gN-十八烷基-N-(2-磺酸基)丙基-N，N-二甲基甜菜碱加入到150ml水中，40℃搅拌溶解1h，完全溶解后，冷却至室温25℃，然后加入3gBSA、5g阻断剂、8g氯化钙、1g亚铁氰化钾，25℃搅拌1h，完全溶解后，用水定容至200ml。 9.根据权利要求8所述的一种B因子检测试剂盒，其特征在于，所述稳定剂的制备方法为：取0.5g酪蛋白、4g明胶、3.5g黄原胶加入到400mL水中，60℃搅拌1h，完全溶解后，冷却至室温25℃，然后加入5g烷基酚聚氧乙烯醚磷酸单酯铵盐和20g山梨糖醇，25℃搅拌2h，完全溶解后，用水定容至500ml。 10.根据权利要求9所述的一种B因子检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的组分及其浓度为：所述缓冲液一9mmol/L-12mmol/L，所述增敏剂12ml/L-35ml/L，所述抗干扰剂5ml/L-12ml/L，5-溴-5-硝基-1,3-二恶烷0.2g/L-0.3g/L；所述试剂R2的组分及其浓度为：所述缓冲液二9mmol/L-12mmol/L，所述兔抗人B因子多克隆抗体包被的胶乳颗粒10ml/L-25ml/L，所述稳定剂6ml/L-15ml/L，5-溴-5-硝基-1,3-二恶烷0.2g/L-0.3g/L。