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原文传递一种多因子液相芯片检测试剂盒

专利名称：	一种多因子液相芯片检测试剂盒
摘要：	本发明涉及一种多因子液相芯片检测试剂盒，其特征在于，包括液相芯片、裂解缓冲液、反应缓冲液及洗涤液，可对同一样本中的多种不同目的分子同时进行分析，灵敏度高，信噪比好，只需要微量的样品即可进行检测，操作简便，耗时短。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	爱必信（上海）生物科技有限公司
发明人：	郭惠芳
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810603239.6
公开号：	CN108663506A
分类号：	G01N33/53(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/53
申请人地址：	201314 上海市浦东新区古丹路15弄18号楼2楼
主权项：	1.本发明涉及一种多因子液相芯片检测试剂盒，其特征在于，包括液相芯片、裂解缓冲液、反应缓冲液及洗涤液；(1)所述液相芯片包括载玻片、微载体及生物探针镀层；所述载玻片为正方形，厚度为2mm，尺寸为8mm×8mm，所述载玻片被均分成n个细胞因子区，n为正整数；在每个所述细胞因子区上，均匀分布有直径为20‑30μm、深度为5‑10μm的圆形凹槽，所述圆形凹槽通过微电子光刻蚀制成；所述微载体由硅橡胶制成；所述生物探针镀层缓冲液包括用Cy3荧光染料标记的目标细胞因子的抗体，所述目标细胞因子的抗体种类数量为m，m为小于或等于n的正整数；所述液相芯片制作步骤如下：a.将所述硅橡胶与固化剂按10:1重量比完全混合，于80‑100℃条件下固化2‑3小时，冷却至室温后脱模；b.将步骤a处理后的所述载玻片浸泡在改性缓冲液中，以重量百分比计，其组成为：聚乙烯醇0.5‑1％、聚醚酰亚胺0.8‑1％、二氧化硅0.05‑1％、聚丙烯酸2‑5％及过硫酸铵1％，其余成分为去离子水；c.取出步骤b处理后所述载玻片，将生物探针镀层缓冲液滴加在所述载玻片的所述细胞因子区的所述圆形凹槽中；d.拭去所述载玻片的圆形凹槽外的所述生物探针镀层缓冲液，将所述载玻片置于氮气保护环境下，在15‑20℃且相对湿度大于80％的条件下，孵育12‑15小时，即得到所述液相芯片；(2)所述裂解缓冲液，以重量百分比计，包括0.05‑0.1％的氯化铵、0.05‑0.1％的氯化钠、0.1‑1.5％的EDTA、0.005‑0.01％的过氧化氢、0.02‑0.1％的TritoAx‑100和0.05‑0.2％的目标蛋白酶k；余下部分为去离子水；(3)所述反应缓冲液，以重量百分比计，包括0.05‑0.15％的磷酸二氢钾、0.01‑0.05％的葡萄糖、0.05‑0.2％的Cy3‑链霉亲和素、0.1‑0.2％的乙二胺四乙酸，余下部分为去离子水；(4)所述洗涤液，以重量百分比计，包括0.05‑0.15％的磷酸二氢钾、0.001‑0.01％的硫氰酸钠、0.05‑0.2％的磷酸氢二钾、0.5‑0.2％SDS、1‑2％的氯化钠，余下部分为去离子水；本发明多因子液相芯片检测试剂盒使用步骤如下：S1、将所述液相芯片置于真空干燥器或者室温干燥1‑2小时；S2、在‑10℃冷冻条件下，将细胞研成粉末，对每100000个细胞，加入10μl所述裂解缓冲液，裂解20‑30分钟，去除上层漂浮的脂质层，以2000rpm转速离心30‑40分钟，取上清液，得到细胞裂解液；S3、在经过步骤S1处理后的所述液相芯片的每个所述细胞因子区中加20～100μl的所述细胞裂解液，室温摇床上孵育2‑3小时；S4、添加50‑80μl的所述反应缓冲液到经过步骤S2处理后的所述液相芯片的每个所述细胞因子区中，用铝箔纸包住所述液相芯片，避光孵育，室温摇床上孵育1‑2小时；S5、除去经过步骤S4处理后的所述液相芯片的每个所述细胞因子区中的所述反应缓冲液，用所述洗涤液对其清洗5次，每次5分钟室温摇床震荡，每次均将所述洗涤液去除干净；S6、将经过步骤S5处理后的所述液相芯片放置在容器中，添加所述洗涤液，使其能整个覆盖所述液相芯片，在室温摇床上震荡15分钟，去除所述洗涤液；S7、将经过步骤S6处理后的所述液相芯片放置于真空干燥器，将温度维持在50‑60℃；S8、用含Cy3通道的激光扫描仪对经过步骤S5处理后的所述液相芯片进行扫描成像，将所述图像存储为tiff文件；用芯片读数软件将每个点的荧光信号转化为数码信号，根据数码信号绘制每个细胞因子的信号与浓度标准曲线。
所属类别：	发明专利