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原文传递一种多项呼吸道病毒抗原联合检测试剂盒及其组装方法

专利名称：	一种多项呼吸道病毒抗原联合检测试剂盒及其组装方法
摘要：	本发明涉及呼吸道病毒体外检测技术领域，尤其涉及IPC G01N33，更具体地涉及，一种多项呼吸道病毒抗原联合检测试剂盒及其组装方法。本发明提供的检测试剂盒采用双抗体夹心法定性检测鼻咽中的甲型流感病毒/乙型流感病毒/新型冠状病毒/呼吸道合胞病毒的抗原，操作简单，结果直观，速度快成本低，适合现场快速检测及居家自检。可用于呼吸道病毒感染疑似人群的初筛检测，帮助明确发热病因，合理选择诊疗方案，同时依据不同级别对病患进行管理处置，防止群体传播事件发生。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海八通生物科技股份有限公司
发明人：	胡小龙;张晓蕊;李照;屈武斐
专利状态：	有效
申请日期：	2023-06-30T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-17T00:00:00+0800
申请号：	CN202310800734.7
公开号：	CN117074669A
代理机构：	上海微策知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	肖烜
分类号：	G01N33/569;G01N33/543;G01N33/558;G01N33/58;G01N33/532;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/558;G01N33/58;G01N33/532
申请人地址：	200030 上海市徐汇区龙吴路2715号2号楼313室
主权项：	1.一种多项呼吸道病毒抗原联合检测试剂盒，其特征在于，包括检测卡、样本稀释液；所述检测卡包括NC膜、吸水纸、塑料件、试剂垫、样品垫、PVC底板；所述试剂垫用纳米碳标记的抗体处理；所述试剂垫处理的过程为，将纳米碳标记的抗体用40％(V/V)纳米碳稀释液稀释，将纳米碳标记的抗体浓度稀释10～15倍，再对玻璃纤维进行铺垫、37℃烘干过夜；将烘干的试剂垫裁切成4～6mm宽，干燥封存；所述纳米碳标记的抗体包括纳米碳标记的FluA和FluB混合抗体、纳米碳标记COVID-19和RSV混合抗体或纳米碳标记兔IgG抗体。 2.根据权利要求1所述的多项呼吸道病毒抗原联合检测试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液包括0.1～0.3M Tris、0.1～0.5％CaseinNa、0.5～0.10％NaCl、0.05～0.2％Proclin-300。 3.根据权利要求1所述的多项呼吸道病毒抗原联合检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫采用样品垫处理液处理；所述样品垫处理方式为用30～50mL的样品垫处理液处理玻璃纤维后，35～39℃烘干过夜。 4.根据权利要求3所述的多项呼吸道病毒抗原联合检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫处理液包括0.5～0.8％Tris、0.2～1.3％BSA、0.1～0.3％CaseinNa、0.2～1.3％Tween-20、0.5～1.0％NaCl、0.3～0.8％PVP、0.2～1.3％CHAPS、0.05～0.15％Proclin-300。 5.根据权利要求1所述的多项呼吸道病毒抗原联合检测试剂盒，其特征在于，所述纳米碳标记的FluA和FluB混合抗体处理过的试剂垫为纳米碳标记FluA和FluB混合抗体试剂垫；所述纳米碳标记的COVID-19和RSV混合抗体处理过的试剂垫为纳米碳标记COVID-19和RSV混合抗体试剂垫；所述纳米碳标记的兔IgG抗体处理过的试剂垫为纳米碳标记兔IgG抗体试剂垫。 6.根据权利要求1所述的多项呼吸道病毒抗原联合检测试剂盒，其特征在于，所述纳米碳标记的FluA和FluB混合抗体的制备方法，包括以下步骤： S1：用超声仪将纳米碳分散液超声均匀，取100～500μL纳米碳分散液溶于离心管； S2：在离心管中，依次加入30～80μL 0.5～1mg/mL的EDC偶联液和NHS偶联液，在37℃下活化20～40min； S3：活化完成后，加入抗体工作液混匀，37℃下偶联30～60min； S4：偶联后，依次加入纳米碳封闭液、10％Tween-20，混匀，37℃封闭25～35min； S5：封闭后，10000～15000r/min、10～20min离心，去上清后加入纳米碳保存液清洗； S6：清洗后，再10000～15000r/min、10～20min离心，去上清后加入纳米碳保存液保存。 7.根据权利要求6所述的多项呼吸道病毒抗原联合检测试剂盒，其特征在于，所述S1中纳米碳分散液制备方法包括以下步骤： 1)、纳米碳分散：称取纳米碳粉，并按纳米碳质量量取纯化水和10％PVP，加入超声杯中，300W功率冰浴超声14～18h，得到纳米碳液1； 2)、纳米碳清洗：将上述分散好的纳米碳液1加入5～8倍体积的纯化水，2000～3000rpm/min离心8～12min；收集上清，再加入5～8倍体积的纳米碳偶联液，300W功率超声3～8min；超声均匀后，9000～11000rpm/min离心50～80min；去上清，加入4～6倍体积的纳米碳偶联液，300W功率超声至均匀，约5-10min，得到纳米碳液2； 3)、纳米碳保存：在可见光分光光度计上测纳米碳液2的OD，用纳米碳偶联液调试OD至0.100～0.200，调好OD后放入2-8℃冰箱保存，得到纳米碳分散液。 8.根据权利要求6所述的多项呼吸道病毒抗原联合检测试剂盒，其特征在于，所述S2中EDC偶联液配制方法包括，在纳米碳偶联液中加入EDC，配制成0.5～1mg/mL的EDC偶联液；所述S2中NHS偶联液配制方法包括，在纳米碳偶联液中加入NHS，配制成0.5～1mg/mL的NHS偶联液。 9.根据权利要求1所述的多项呼吸道病毒抗原联合检测试剂盒，其特征在于，所述NC膜的制备方法，包括以下步骤： M1：将羊抗兔用点膜稀释液稀释到0.1～0.3mg/mL得到C线包被工作液，包被浓度0.1～0.3mg/mL，混匀备用； M2：分别用点膜稀释液将抗体稀释到对应浓度得到T线包被工作液，包被浓度：COVID-19：1.3～1.8mg/mL；RSV、FluA、FluB：1.1～1.3mg/mL，混匀备用； M3：在板60mm280mm上，撕掉中间处的保护纸，将NC膜沿下面保护纸的上边缘粘贴； M4：采用喷金划膜仪，将C线包被工作液、T包被工作液：COVID-19：1.3～1.8mg/mL；RSV1.1～1.3mg/mL分别划在固定于底板上的NC膜上，形成T1-1线COVID-19和T2-1线RSV，T1-1和T2-1间隔距离为3.0～4.0mm，划液量：0.8～1.2μL/cm；划膜速度：50～70mm/s； M5：另取板60mm280mm上，撕掉中间处的保护纸，将NC膜沿下面保护纸的上边缘粘贴；采用喷金划膜仪，将C线包被工作液、T包被工作液：FluA、FluB：1.2mg/mL分别划在固定于底板上的NC膜上，形成T1-2线FluA和T2-2线FluB，T1-2和T2-2间隔距离为3.0～4.0mm，划液量：0.8～1.2μL/cm；划膜速度：50～70mm/s； M6：将划好的两块NC膜37℃烘干过夜，密封备用。 10.根据权利要求1～9任一项所述的多项呼吸道病毒抗原联合检测试剂盒的组装方法，其特征在于，包括以下步骤： N1：在PVC底板上，贴上吸水纸，再贴上NC膜，然后依次贴上纳米碳标记COVID-19和RSV混合抗体试剂垫5mm、纳米碳标记兔IgG抗体试剂垫5mm、样品垫，形成大卡1； N2：在PVC底板上，贴上吸水纸，再贴上NC膜，然后依次贴上纳米碳标记FluA和FluB混合抗体试剂垫5mm、纳米碳标记兔IgG抗体试剂垫5mm、样品垫，形成大卡2； N3：将大卡1和大卡2分别切割成3-4mm宽的试纸条1、试纸条2，按左侧为试纸条1、右侧为试纸条2安装到塑料件上，加干燥剂于常温下密封保存，即为所述的检测卡； N4：将检测卡、干燥剂各一份装入包装袋中密封，并取一次性鼻拭子、样本稀释液装盒。