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原文传递测定皮质醇含量的方法及其应用

专利名称：	测定皮质醇含量的方法及其应用
摘要：	本发明涉及体外诊断技术领域，尤其涉及测定皮质醇含量的方法及其应用。本发明提供了液相色谱的预处理试剂组合以及液相色谱中尿液样本预处理的方法、检测尿液中皮质醇含量的方法。本发明提供的检测尿液样本中的皮质醇含量的方法，该方法前处理方便快捷，通过方法确认，各项性能指标优异。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	郑州安图生物工程股份有限公司
发明人：	刘功成;李亚博;刘春龙;韩艳林;梁曼;吴学炜;付光宇
专利状态：	有效
申请日期：	2023-05-24T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-07T00:00:00+0800
申请号：	CN202310611466.4
公开号：	CN117007698A
代理机构：	北京集佳知识产权代理有限公司
代理人：	赵青朵
分类号：	G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/62;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/62
申请人地址：	450016 河南省郑州市经济技术开发区经北一路87号
主权项：	1.液相色谱的预处理试剂组合，其特征在于，包括溶液A、溶液B和溶液C；其中，所述溶液A为氨水甲醇水溶液，溶液B为甲酸甲醇水溶液，溶液C为乙腈甲醇溶液；所述氨水甲醇水溶液中氨水的体积分数为0.05％～1％，甲醇的体积分数为5％～40％，余量为水；所述甲酸甲醇水溶液中甲酸的体积分数为0.05％～1％，甲醇的质量分数为5％～40％，余量为水；所述乙腈甲醇溶液中乙腈的体积分数为60％～90％，甲醇的体积分数为10％～40％。 2.权利要求1所述的预处理试剂组合在制备检测尿液中皮质醇含量的产品中的应用。 3.皮质醇含量检测预处理试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的预处理试剂组合、水以及96孔萃取板，所述萃取板中的填料为亲水-亲脂平衡反相吸附剂。 4.尿液中皮质醇检测的预处理方法，其特征在于，包括将样本以水稀释后上样，然后依次利用权利要求1或3所述溶液A和溶液B对样本进行洗涤，然后以权利要求1或3所述溶液C对样本进行洗脱。 5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述稀释步骤中，样本与水的体积比为：(1～20)：(15～34)；所述样本、溶液A和溶液B的体积比为(20～400)：150：150，所述洗脱步骤中，还包括预加入水的步骤，所述预加入水与溶液C的体积比为70:30；所述溶液C与样本的体积比为(20～400)：30。 6.液相色谱联用质谱检测尿液中皮质醇的方法，其特征在于，包括以权利要求4或5所述的方法进行预处理后，将洗脱液以UPLC-MS进行检测。 7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述UPLC的色谱条件包括：色谱柱为BEH类型色谱柱和/或T3类型色谱柱，柱温为45℃；流动相A为甲醇，流动相B为0.1％(v/v)甲酸水溶液，流动相的流速为3mL/min；梯度洗脱的条件为： 0～0.5min，45vol％流动相A+55vol％流动相B； 3.5min，80vol％流动相A+20vol％流动相B； 4～5min，95vol％流动相A+5vol％流动相B； 5.5～8min，45vol％流动相A+55vol％流动相B。 8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述质谱检测的参数包括ESI离子源，正离子模式；所述正离子模式中，目标定量离子对包括皮质醇离子对和/或皮质醇内标物的离子对，电喷雾针电压为2.7～3.0kV，离子源温度为150℃，脱溶剂气温度为450～600℃，碰撞气为氦气，脱溶剂气流为800～1000L/Hr。 9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述目标定量离子的多反应监测离子扫描MRM的质荷比条件包括：皮质醇的定量离子对为363＞121，锥孔电压为30～45V，碰撞电压为18～25V，定性离子对为363＞309，锥孔电压为30～45V，碰撞电压为18～25V； d4-皮质醇定量离子对为367＞331，锥孔电压为30～45V，碰撞电压为18～25V，定性离子对为367＞121,锥孔电压为30～45V，碰撞电压为18～25V。 10.根据权利要求6～9任一项所述的方法，其特征在于，在所述UPLC-MS/MS后，利用括号法定量检测结果，包括将20μL～400μL样本，加入内标溶液，其中以高低标溶液定量样本中皮质醇的含量；所述内标溶液含有分析物的同位素标记物，其中，样本中分析物与内标的信号响应为1.0±0.2，低标溶液中分析物与内标的信号响应为0.9±0.2，高标中分析物与内标的响应为1.1±0.2。
所属类别：	发明专利