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原文传递一种检测血液中线粒体肌酸激酶含量的试剂盒及测定方法

专利名称：	一种检测血液中线粒体肌酸激酶含量的试剂盒及测定方法
摘要：	本发明涉及蛋白检测技术领域，且公开了一种检测血液中线粒体肌酸激酶含量的试剂盒及测定方法，试剂盒包含如下组分：组分A：包被磁性微球的广泛型线粒体肌酸激酶‑2抗体(2D5)；组分B：标志发光标志物的广泛型线粒体肌酸激酶‑1抗体(4E2)；组分C：低浓度校准品溶液(浓度39.06ng/mL)和高浓度校准品溶液(浓度1250ng/mL)；各组分均含有乙酰胺和防腐剂。针对所选抗原表位区域的抗体能够相互组合用于广泛型线粒体肌酸激酶的高灵敏度和特异性检测。针对所选抗原表位区域的抗体能够相互补充各自检测的不足，提高检出率，能够随时监测受试者的广泛型线粒体肌酸激酶含量，这对基层医院或者病房尤其重要。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	青岛市中心医院
发明人：	牟晓峰;张磊;王晔;朱婕;毕庆庆
专利状态：	有效
申请日期：	2023-07-21T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-17T00:00:00+0800
申请号：	CN202310901721.9
公开号：	CN117074675A
代理机构：	广东执一律师事务所
代理人：	吕剑雄
分类号：	G01N33/573;G01N33/543;G01N33/574;G01N21/76;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N33/573;G01N33/543;G01N33/574;G01N21/76
申请人地址：	266000 山东省青岛市四流南路127号
主权项：	1.一种检测血液中线粒体肌酸激酶含量的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含如下组分：组分A：包被磁性微球的广泛型线粒体肌酸激酶-2抗体；组分B：标志发光标志物的广泛型线粒体肌酸激酶-1抗体；组分C：低浓度校准品溶液(浓度39.06ng/mL)和高浓度校准品溶液(浓度1250ng/mL)；各组分均含有乙酰胺和防腐剂。 2.根据权利要求1所述的一种检测血液中线粒体肌酸激酶含量的试剂盒，其特征在于：所述组分A中的磁性微球为以下任意一种：表面有环氧基、氨基、醛基、磺酰基、羧基、酰胺基、巯基或羟基修饰的磁性微球，工作浓度为1-10mg/mL；所述组分A中广泛型线粒体肌酸激酶-2抗体的工作浓度为50-100ng/mL。 3.根据权利要求1所述的一种检测血液中线粒体肌酸激酶含量的试剂盒，其特征在于：所述组分B中发光标志物为以下任意一种：鲁米诺及其衍生物、异鲁米诺及其衍生物、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶，工作浓度为100-200ng/mL；所述组分B中广泛型线粒体肌酸激酶-1抗体的工作浓度为100-500ng/mL。 4.根据权利要求1所述的一种检测血液中线粒体肌酸激酶含量的试剂盒，其特征在于：所述乙酰胺质量体积百分浓度为0.1-0.5％；所述防腐剂为叠氮钠、亚硝酸钠、苯甲酸钠、Proclin系列、山梨酸钾中的任一种或两种以上混合物。 5.根据权利要求1所述的一种检测血液中线粒体肌酸激酶含量的试剂盒，其特征在于：所述筛选到的抗体：1A2、1B1、2D5、3C6、4E2、5E6、6F6、7G3；所述所选抗原表位区域选自SEQID NO:1的1-50aa、51-87aa、90-150aa、120-186aa。 6.根据权利要求5所述的一种检测血液中线粒体肌酸激酶含量的试剂盒，其特征在于：所述验证数据包括如下： (1)选取特定的抗体对组合能够实现对广泛型线粒体肌酸激酶的检测；针对50例待测样本，用化学发光试剂进行检测，比较发光强度差异，选取发光强度大于250000的； (2)评价2D5、4E2、1A2、7G3抗体表位抗体组配的诊断准确性及漏检率；抗体配对方案：2D5+4E2、7G3+4E2、1A2+2D5、1A2+7G3；阳性漏检率＝阳性漏检数/肿瘤患者数×100％；特异性＝阴性样本数/健康体检样本数×100％； (3)采用抗体组合方案2D5、4E2检测待测样本，评估试剂盒对临床样本的敏感性；待测样本：为通过临床诊断及其他商业试剂筛查已经确诊的癌症患者血清、正常人血清；待测样本的收集：受检者均于早晨空腹抽静脉血3mL，分离血清，置于-20℃冰箱保存；检测性能评估：敏感性＝真阳性/(真阳性+假阴性)。 7.根据权利要求6所述的一种检测血液中线粒体肌酸激酶含量的试剂盒，其特征在于：所述验证结果包括如下： (1)2D5+4E2、7G3+4E2、1A2+2D5、1A2+7G3，可用于广泛型线粒体肌酸激酶的检测； (2)2D5+4E2和7G3+4E2的组合的特异性优于1A2+2D5和1A2+7G3的组合； (3)本发明的抗体组合方式对临床肿瘤样本的检测具有良好的敏感性。 8.根据权利要求7所述的一种检测血液中线粒体肌酸激酶含量的试剂盒，其特征在于：所述2D5特异性识别SEQ ID NO:1的51-87aa，4E2特异性识别SEQ ID NO:1的90-150aa。 9.根据权利要求1所述的一种检测血液中线粒体肌酸激酶含量的试剂盒，其特征在于：所述包被磁性微球的广泛型线粒体肌酸激酶-2抗体为2D5；所述标志发光标志物的广泛型线粒体肌酸激酶-1抗体为4E2。
所属类别：	发明专利