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原文传递检测血液中雌二醇含量的方法

专利名称：	检测血液中雌二醇含量的方法
摘要：	本发明提供了一种检测血液中雌二醇含量的方法，该方法包括：向固定量的具有已知浓度内标物的内标工作液中，添加待检测样品离心后的第一上清液混合，并添加萃取剂混合，高速离心，取第二上清液，其中，第一上清液的添加量为200‑500μL，萃取剂为甲基叔丁基醚；通过氮吹方式，吹干第二上清液，通过稀释液溶解吹干后的剩余物，混合，高速离心，取第三上清液，稀释液为含有20％～80％水的甲醇溶液；利用高效液相串联质谱仪，检测第三上清液；基于第三上清液的检测结果和高效液相串联质谱仪检测出的雌二醇标准曲线，得到待检测样品中雌二醇的浓度。本发明提供的方案实现了直接检测雌二醇。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京和合医学诊断技术股份有限公司
发明人：	邱天祎;解娜;贾永娟;倪君君
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-05T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-05T00:00:00+0800
申请号：	CN201910837946.6
公开号：	CN110412176A
代理机构：	济南信达专利事务所有限公司
代理人：	程佩玉
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	101111 北京市北京经济技术开发区经海六路5号院14号楼1层、2层、3层、5层、6层、7层
主权项：	1.检测血液中雌二醇含量的方法，其特征在于，包括：向固定量的具有已知浓度内标物的内标工作液中，添加待检测样品离心后的第一上清液混合，并添加萃取剂混合，高速离心，取第二上清液，其中，所述第一上清液的添加量为200-500μL，所述萃取剂为甲基叔丁基醚；通过氮吹方式，吹干所述第二上清液，通过稀释液溶解吹干后的剩余物，混合，高速离心，取第三上清液，所述稀释液为含有20％～80％水的甲醇溶液；利用高效液相串联质谱仪，检测所述第三上清液；基于所述第三上清液的检测结果和高效液相串联质谱仪检测出的雌二醇标准曲线，得到所述待检测样品中雌二醇的浓度。 2.根据权利要求1所述的检测血液中雌二醇含量的方法，其特征在于，所述高效液相串联质谱仪中，高效液相色谱的色谱条件包括：长度为50mm、内径为2.1mm以及填料粒径为1.7μm的C18色谱柱；在线过滤器为SSICOL PRE-FILTER WATER 1/16 0.5M；流动相为乙腈以及含0.1mM NH4F的水；分析时长为5.0min；柱温为30～45℃；进样量为10-50μL；流速为0.20-0.60mL/min。 3.根据权利要求2所述的检测血液中雌二醇含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱采用梯度洗脱；所述梯度洗脱条件：洗脱总时长为5min；开始采用洗脱流动相为40％乙腈以及60％含0.1mM NH4F的水进行洗脱；洗脱时间长到达1.70min，洗脱流动相转换为84％乙腈以及16％含0.1mM NH4F的水；洗脱时间长到达1.71min，洗脱流动相转换为98％乙腈以及2％含0.1mM NH4F的水；洗脱时间长到达3.51min，洗脱流动相转换为40％乙腈以及60％含0.1mM NH4F的水；所述洗脱流动相流速为0.45mL/min。 4.根据权利要求1至3任一所述的检测血液中雌二醇含量的方法，其特征在于，所述高效液相串联质谱仪中，串联质谱条件包括： ESI(-)检测模式，采集模式为MRM，气帘气压力为20psi，碰撞气为9psi，喷雾电压值为-4500V，离子化温度为600℃，雾化气压力为30psi；辅助气压力为50psi。 5.根据权利要求1所述的检测血液中雌二醇含量的方法，其特征在于，所述固定量的具有已知浓度内标物的内标工作液为10μL的浓度为2ng/mL的雌二醇-d3；和/或，所述甲基叔丁基醚的用量为0.8-1.2mL。 6.根据权利要求1所述的检测血液中雌二醇含量的方法，其特征在于，所述稀释液用量100μL；和/或，所述稀释液中的水：甲醇＝3：7。 7.根据权利要求1至6任一所述的检测血液中雌二醇含量的方法，其特征在于，所述雌二醇标准曲线中的两个变量分别为：雌二醇的色谱峰面积与对应内标物的色谱峰面积的比值以及雌二醇浓度与对应内标物浓度的比值。 8.根据权利要求1至6任一所述的检测血液中雌二醇含量的方法，其特征在于，进一步包括：制备标准工作液：利用所述稀释液对浓度为1mg/mL的雌二醇标准储备液进行稀释，在至少三个不同浓度的标准工作液，所述标准工作液含雌二醇浓度为60pg/mL～30000pg/mL，并在-80℃条件下保存；制备内标工作液：向10μL，浓度为1mg/mL的雌二醇-d3标准储备液加入990uL所述稀释液进行稀释，并1500r/min涡旋混合1min，得内标中间液；取10μL内标中间液于50mL容量瓶中，加入所述稀释液定容至50ml，振荡，得到浓度为2ng/mL的内标工作液，-80℃条件下保存；制备标准溶液：为每一种浓度的标准工作液取10μL内标工作液，并加入10μL对应浓度的标准工作液，另加入80μL稀释液混合制成至少三种标准溶液；所述雌二醇的标准曲线是由高效液相串联质谱仪检测至少三种标准溶液的检测结果拟合出的。 9.根据权利要求8所述的检测血液中雌二醇含量的方法，其特征在于，所述至少三种标准工作液，包括：雌二醇浓度分别为60pg/mL、180pg/mL、540pg/mL、1620pg/mL、4860pg/mL、14580pg/mL以及30000pg/mL的标准工作液。 10.根据权利要求1至6，9中任一所述检测血液中雌二醇含量的方法，其特征在于，所述混合为在1000-2500rpm转速下涡旋混合，其中，添加所述萃取剂后的混合时长控制在4～8min，所述萃取剂和吹干后的剩余物的混合时长控制在1～3min；和/或，高速离心的转速不低于10000rpm，高速离心的时长为4-6min。
所属类别：	发明专利