主权项: |
1、定量测定植物中草药提取成分中雌二醇含量的方法,应用雌二醇定量测
定试剂盒所提供的试剂,使用该试剂盒的使用说明书所提供磁分离酶联免疫法,
其特征是:将植物中草药提取液作为标本,按该试剂盒的使用说明书的步骤进
行操作;具体按下述三步骤:a、第一次孵育-免疫反应,b、第二次孵育-酶
反应,c、读取吸光值;
a、第一次孵育-免疫反应
a.1、吸取45ul各浓度标准品、质控品、标本,加之标记好的相应试管的底部;
a.2、加60ulE2抗试剂至各试管,混匀;
a.3、试管连架置37℃水浴20分钟;
a.4、加60ul E2衍生物至各试管,混匀;
a.5、试管连架置37℃水浴20分钟;
a.6、加60ul磁分离试剂至各试管,混匀;
a.7、试管连架置37℃水浴5分钟;
a.8、试管连架放入磁分离器,磁场中沉淀2分钟,确保每支试管底部都与分离
器表面接触;
a.9、用一大而缓慢的圆周运动倒转分离器,倒出上清液,把倒转的试管放在滤
纸上,用强有力的动作拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴;
a.10、放正分离器,加150ul稀释后的清洗液至各试管;
a.11、放至涡旋机,激烈振荡,彻底混匀;
a.12、试管连架放人磁分离器,磁场中沉淀2分钟;确保每支试管底部都与分
离器表面接触;
a.13、用一大而缓慢的圆周运动倒转分离器,倒出上清液,把倒转的试管放在
滤纸上,用强有力的动作拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴;
a.14、重复a.10-a.13步骤两次;
b、第二次孵育-酶反应
b.1、为磁分离免疫测定仪校零,准备1支空白试管,做好标记,放置试管架上;
b.2、从分离器取出试管架,加90ul基质至各试管,包括空白管;彻底混匀;
b.3、试管连架置37℃水浴30分钟;
b.4、加300ul终止液至各试管,包括空白管,其顺序与加基质顺序相同;
b.5、把试管架放人磁分离器,沉淀时间不少于10分钟;
c、读取吸光值
用空白管在550nm校零;在550nm、492nm读取标准品、质控品、标本的吸
光值。 |