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原文传递检测血液中苯妥英钠的方法

专利名称：	检测血液中苯妥英钠的方法
摘要：	本发明的检测血液中苯妥英钠的方法包括：制备苯妥英钠标准储备液、制备苯妥英钠的标准中间液、制备内标工作液、制备标准溶液和利用液相色谱‑质谱联用仪检测标准溶液，拟合得到苯妥英钠对应的标准曲线方程为：y1＝a*x1+b；对待测血液进行处理，利用液相色谱‑质谱联用仪检测待测血液，计算出待测血液中的苯妥英钠浓度。在本发明中，对待测血液样品的处理方法以及内标物的选择，使得苯妥英钠的识别更为准确，分析时间短、干扰小，内标定量适宜特异性强、灵敏度高，同时，回收率，检测限和精密度等各项技术指标均符合要求，从而提高检测结果的准确度，消除系统误差。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京和合医学诊断技术股份有限公司
发明人：	雒琴;贾永娟;倪君君
专利状态：	有效
申请日期：	2019-11-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-12-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201911099550.2
公开号：	CN110632235A
代理机构：	北京双收知识产权代理有限公司
代理人：	解政文
分类号：	G01N30/89(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	101111 北京市大兴区经济技术开发区经海六路5号东尚E园14号楼
主权项：	1.一种检测血液中苯妥英钠的方法，其特征在于：它包括以下步骤： (一)标准溶液的标定 (a)制备苯妥英钠标准储备液精确称取苯妥英钠标准品10.0mg置于5mL容量瓶，用含水量为0％～30％的甲醇溶液进行溶解，并定容于5mL，得到苯妥英钠标准储备液，在-80℃条件下保存； (b)制备苯妥英钠的标准中间液用含水量为0％～30％甲醇稀释液稀释上述苯妥英钠标准储备液，制成含有浓度为12.5mg/L～400mg/L的苯妥英钠的至少三种苯妥英钠的标准中间液，并在-80℃条件下保存； (c)制备内标工作液用含水量为0％～30％甲醇稀释液稀释环庚米特储备液，得到一种含有10～50mg/L环庚米特的内标工作液，并在-80℃条件下保存； (d)制备标准溶液分别移取10μL上述至少三种浓度的苯妥英钠标准中间液，在上述每一种苯妥英钠标准中间液中分别加入10μL的内标工作液和1090μL甲醇，并在转速为1000～2000rpm下涡旋混匀30s～1min，取上清液100μL，并加入400μL甲醇，在转速为1000～2000rpm下涡旋混匀30s～1min，制成至少三种不同浓度的标准溶液，其中，每一种浓度的标准溶液中包含的内标物的浓度相同； (e)拟合标准曲线方程利用液相色谱-质谱联用仪检测上述每一种浓度的标准溶液，得到至少三种不同浓度的标准溶液的苯妥英钠和环庚米特的图谱；从上述每种浓度的标准溶液的图谱中分别得到苯妥英钠的色谱峰峰面积和环庚米特的色谱峰峰面积，分别以上述至少三种不同浓度的标准溶液中的苯妥英钠的色谱峰峰面积与环庚米特的色谱峰峰面积的比值作为标准曲线方程的纵坐标y1，以上上述至少三种不同浓度的标准溶液中的苯妥英钠的浓度与环庚米特的浓度的比值作为标准曲线的横坐标x1，将上述检测所得的至少三种不同浓度的数据进行线性回归，拟合得到苯妥英钠对应的标准曲线方程为：y1＝ax1+b，并且得到权重系数a和b； (二)待测血液样本的处理取待测血液至少2mL，在离心速度3500rpm下离心10min，提取待测血液的上清液，并在-20℃条件下保存；移取步骤(c)的环庚米特的内标工作液10μL于1.5mL离心管中，再加入上述待测血液的上清液100μL，在1500-2500rpm的转速下涡旋震荡混合30s-1min，然后再在上述离心管中加入萃取液1000μL，在1200-2000rpm的转速下涡旋震荡混合5-10min后，再在1000-150000rpm的转速下高速离心5-10min，取上清液后用氮气缓慢吹干，再加入复溶液500μL，在1500-2500rpm的转速下涡旋震荡混合1-3min，得到上清液即为待测血液样本； (三)待测血液样本的检测利用液相色谱-质谱联用仪检测上述待测血液样本，得到待测血液样本中的苯妥英钠的色谱峰峰面积和环庚米特的色谱峰峰面积；将待测血液样本中的苯妥英钠的色谱峰峰面积与环庚米特的色谱峰峰面积的比值作为y1，代入步骤(e)得到的y1＝ax1+b公式中，计算得到待测血液样本中的苯妥英钠的浓度与环庚米特的浓度的比值x1，由于上述待测血液样本中，环庚米特的浓度为已知，由此计算出待测血液样本中的苯妥英钠浓度。 2.如权利要求1所述的检测血液中苯妥英钠的方法，其特征在于：在步骤(b)中，制备七种含有不同浓度苯妥英钠的标准中间液，它们分别是含有12.5、25、50、100、150、200、400mg/L苯妥英钠浓度的标准中间液。 3.根据权利要求2所述的检测血液中苯妥英钠的方法，其特征在于：在步骤(b)和步骤(d)中，所述甲醇稀释液为含水量30％甲醇溶液，在步骤(a)中，用纯甲醇溶解苯妥英钠标准品。 4.根据权利要求3所述的检测血液中苯妥英钠的方法，其特征在于：在步骤(二)中，萃取液为乙酸乙酯；复溶液为纯甲醇溶液。 5.根据权利要求4所述的检测血液中苯妥英钠的方法，其特征在于：在步骤(c)中，用纯甲醇稀释液稀释环庚米特储备液，得到一种含有10mg/L环庚米特的内标工作液。 6.根据权利要求5所述的检测血液中苯妥英钠的方法，其特征在于：所述液相色谱-质谱联用仪的色谱条件包括：C8反向色谱柱；柱温为20～40℃；流动相为：含0.1％甲酸的水溶液和纯甲醇溶液，其中，所述水溶液与所述纯甲醇溶液的体积比为45∶55，所述水溶液与所述甲醇溶液的等度洗脱时间不小于2.5min；流动相的流速为0.2～0.8mL/min。 7.根据权利要求6所述的检测血液中苯妥英钠的方法，其特征在于：所述液相色谱-质谱联用仪的质谱条件包括：液相色谱-质谱联用仪的质谱检测器为ESI(+)模式；离子源参数包括：气流量为8～50L/min，喷雾量为20～50L/min，气体温度为300～400℃，毛细管电压为3000～5000V。 8.根据权利要求7所述的检测血液中苯妥英钠的方法，其特征在于：所述C8反向色谱柱为Agilent Zorbax XDB-C8。 9.根据权利要求8所述的检测血液中苯妥英钠的方法，其特征在于：所述液相色谱-质谱联用仪的在线过滤器为SSI COL PRE-FILTER WATER 1/16 0.5M。
所属类别：	发明专利