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原文传递生物学样品制备和分析

专利名称：	生物学样品制备和分析
摘要：	本发明要求保护并且描述了用于制备液体样品的方法和试剂盒。所述方法可以包括用水解酶处理液体样品，水解所述液体样品以制备水解物，和用基于磁性的纯化来纯化所述水解物。在某些方面，所述水解酶结合至磁珠或磁性颗粒。用于制备液体样品的试剂盒可以包含水解酶，磁珠或磁性颗粒，一个或多个内部标准，液相色谱柱和一种或多种待用作流动相的溶剂，一种或多种校准溶液，和使用说明书。
专利类型：	发明专利
申请人：	DH科技发展私人贸易有限公司
发明人：	A·斯特拉;刘畅;Y·刘;S·普尔卡亚沙
专利状态：	有效
申请日期：	2022-03-21T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-24T00:00:00+0800
申请号：	CN202280027774.6
公开号：	CN117120845A
代理机构：	中国贸促会专利商标事务所有限公司
代理人：	傅宇昌
分类号：	G01N33/543;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/543
申请人地址：	新加坡新加坡
主权项：	1.制备液体样品的方法，其包括：用水解酶处理所述液体样品，水解所述液体样品以制备水解物，和用基于磁性的纯化来纯化所述水解物。 2.权利要求1的方法，其中所述液体样品为生物学样品。 3.权利要求2的方法，其中所述生物学样品选自由下列各项组成的组：尿、血液、口腔液和血浆。 4.前述权利要求中任一项的方法，其中所述水解酶结合至磁珠或磁性颗粒。 5.前述权利要求中任一项的方法，其中所述基于磁性的纯化使用磁珠或磁性颗粒。 6.权利要求5的方法，其中所述基于磁性的纯化进一步包括下列步骤：用沉淀剂使在所述水解物中的蛋白质和/或任何过量的水解酶沉淀，将所述磁珠或磁性颗粒与沉淀出的蛋白质一起温育对于产生悬浮液来说足够的时间，和通过磁力将所述磁珠或磁性颗粒与所述悬浮液分开以产生上清液。 7.权利要求6的方法，其中所述沉淀剂选自由下列各项组成的组：锌盐、硫酸锌、二醇类、醇类、酸类、硫酸盐、酸类、乙腈及其组合。 8.权利要求7的方法，其中所述沉淀剂为0.4M硫酸锌。 9.权利要求4-8中任一项的方法，其中所述基于磁性的纯化基于免疫纯化或亲和纯化。 10.权利要求9的方法，其中所述磁珠或磁性颗粒包含以高亲和力与特定靶标相结合的单克隆抗体、多克隆抗体、合成抗体模拟物、适配体、affimer、DARPin或寡核苷酸或肽。 11.权利要求10的方法，其中所述磁珠或磁性颗粒包含链霉抗生物素蛋白，并且所述水解酶包含生物素。 12.权利要求4-8中任一项的方法，其中所述基于磁性的纯化基于离子交换。 13.权利要求12的方法，其中所述磁珠或磁性颗粒具有从由下列各项组成的组中选择的表面涂层：葡聚糖、羧酸钠、磷酸盐、磷酸氢盐、聚丙烯酸、油酸、二氧化硅、氯化2-羟丙基三甲基铵、聚乙烯亚胺、二乙氨基乙基纤维素、聚(4-乙烯基吡啶)和磺酸钠。 14.前述权利要求中任一项的方法，其中所述液体样品进一步包含内部标准。 15.前述权利要求中任一项的方法，其中所述水解酶能够水解糖苷键。 16.前述权利要求中任一项的方法，其中所述水解酶为β-葡糖醛酸糖苷酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、蛋白酶、LysC、LysN、AspN、GluC、ArgC、链霉蛋白酶、胃蛋白酶、氨酰基脯氨酸二肽酶。 17.前述权利要求中任一项的方法，其中所述水解酶能够水解可待因-6-葡糖苷酸键和吗啡-6-葡糖苷酸键。 18.前述权利要求中任一项的方法，其中所述水解步骤进行直至20分钟。 19.权利要求18的方法，其中所述水解步骤进行大约15分钟。 20.前述权利要求中任一项的方法，其中所述水解步骤在直至大约60℃的温度下进行。 21.权利要求20的方法，其中所述水性生物学样品在大约55℃的温度下进行水解。 22.权利要求3-21中任一项的方法，其中所述温育进一步包括将所述磁珠或磁性颗粒与所述水解物一起进行混合、摇动或涡旋振荡。 23.权利要求6-22中任一项的方法，其进一步包括将所述上清液分成等分试样。 24.权利要求23的方法，其中通过使用色谱法仪器、微流、固相提取来分开和/或富集所述经等分的上清液。 25.权利要求24的方法，其中所述色谱法仪器为高效液相色谱法(HPLC)仪器或超高效液相色谱法(UPLC)仪器。 26.权利要求24或权利要求25的方法，其中通过使用捕集-洗脱工作流程来分开和/或富集所述经等分的上清液。 27.权利要求23-26中任一项的方法，其中将所述经等分的上清液以声学方式注射到开放端口接口中，并且转移至电离源或直接注射到电离源中。 28.权利要求27的方法，其中所述经电离的上清液用分析仪来进行分析。 29.权利要求28的方法，其中所述分析仪为质谱仪。 30.权利要求29的方法，其中在用质谱仪分析所述经电离的上清液之前，通过使用差分迁移率光谱测定法来从所述经电离的上清液中选择目的离子。 31.前述权利要求中任一项的方法，其中将所述方法用于制备用于临床分析的液体样品。 32.权利要求31的方法，其中将所述临床分析用于筛选滥用药物。 33.权利要求32的方法，其中所述滥用药物选自由下列各项组成的组：苯丙胺类、去氧麻黄碱类、苯二氮杂类、巴比妥酸盐类、麻利华纳、可卡因、PCP、美沙酮和阿片样物质(麻醉品)。 34.用于制备液体样品的试剂盒，其中所述试剂盒包含：水解酶，其选自由下列各项组成的组：β-葡糖醛酸糖苷酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、蛋白酶、LysC、LysN、AspN、GluC、ArgC、链霉蛋白酶、胃蛋白酶、氨酰基脯氨酸二肽酶和经生物素化的酶，和磁珠或磁性颗粒，其中所述磁珠或磁性颗粒包含单克隆抗体、多克隆抗体、链霉抗生物素蛋白，或者具有从由下列各项组成的组中选择的表面涂层：葡聚糖、羧酸钠、磷酸盐、磷酸氢盐、聚丙烯酸、油酸、二氧化硅、氯化2-羟丙基三甲基铵、聚乙烯亚胺、二乙氨基乙基纤维素、聚(4-乙烯基吡啶)和磺酸钠，一个或多个内部标准，液相色谱柱和一种或多种待用作流动相的溶剂，一种或多种校准溶液，和使用说明书。
所属类别：	发明专利