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原文传递一种将微量组织细胞固定制作石蜡切片的方法

专利名称：	一种将微量组织细胞固定制作石蜡切片的方法
摘要：	本发明涉及细胞组织的固定包埋技术领域，尤其是涉及一种将微量组织细胞固定制作石蜡切片的方法。本发明首先收集生长状态良好的组织细胞，置于质量分数为4％的多聚甲醛中低温固定，得到固定后的样本；然后将固定后的样本洗涤、离心后处理，并加入染色液，得到预染样本；将预染样本置于低熔点琼脂糖模具中进行聚集；在预染样本上层加入琼脂糖进行预染样本的封闭包裹，得到封闭样本；最后将获得的样本进行常规固定、脱水、浸蜡、包埋切片。本发明通过将组织细胞聚集在低熔点琼脂糖模具内可方便的对细胞组织进行浸蜡包埋，制作石蜡标本进行后续的分子病理分析。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	复旦大学附属肿瘤医院
发明人：	邓云;金鑫;宣言;许蓝月;吴显;夏凡;章真
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-31T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-17T00:00:00+0800
申请号：	CN202311115925.6
公开号：	CN117074141A
代理机构：	上海科盛知识产权代理有限公司
代理人：	叶敏华
分类号：	G01N1/28;G01N1/30;G01N1/36;G01N1/42;G;G01;G01N;G01N1;G01N1/28;G01N1/30;G01N1/36;G01N1/42
申请人地址：	200032 上海市徐汇区东安路270号
主权项：	1.一种将微量组织细胞固定制作石蜡切片的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)收集生长状态良好的组织细胞，置于质量分数为4％的多聚甲醛中低温固定，得到固定后的样本； (2)将步骤(1)得到的固定后的样本洗涤、离心后处理，并加入染色液，得到预染样本； (3)将步骤(2)得到的预染样本置于低熔点琼脂糖模具中进行聚集； (4)步骤(3)结束后，在预染样本上层加入琼脂糖进行预染样本的封闭包裹，得到封闭样本； (5)将步骤(4)获得的样本进行常规固定、脱水、浸蜡、包埋切片。 2.根据权利要求1所述的一种将微量组织细胞固定制作石蜡切片的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述组织细胞选自原代培养细胞、类器官、活检穿刺的细胞组织中的一种；固定的样本量为0.1mg～1mg，整体细胞量低于106。 3.根据权利要求1所述的一种将微量组织细胞固定制作石蜡切片的方法，其特征在于，步骤(1)中，低温固定过程中，温度为0℃～10℃，时间为4h～24h。 4.根据权利要求1所述的一种将微量组织细胞固定制作石蜡切片的方法，其特征在于，步骤(2)中，固定后的样本与染色液体积比为30～50：1～5。 5.根据权利要求1所述的一种将微量组织细胞固定制作石蜡切片的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述染色液选自中性红、台盼蓝、甲基蓝、美蓝中的一种或几种。 6.根据权利要求1所述的一种将微量组织细胞固定制作石蜡切片的方法，其特征在于，步骤(3)中，低熔点琼脂糖模具通过以下方法制备得到：将低熔点琼脂糖凝胶加入离心管中，在低熔点琼脂糖凝胶中插入吸头，凝固后拔出吸头，形成具有内部空心结构的低熔点琼脂糖模具。 7.根据权利要求6所述的一种将微量组织细胞固定制作石蜡切片的方法，其特征在于，所述低熔点琼脂糖凝胶中低熔点琼脂糖的质量分数为1％～2％。 8.根据权利要求6所述的一种将微量组织细胞固定制作石蜡切片的方法，其特征在于，吸头距离离心管底4mm～6mm。 9.根据权利要求6所述的一种将微量组织细胞固定制作石蜡切片的方法，其特征在于，以0.2mL离心管体积计，低熔点琼脂糖凝胶的加入量为50μL～100μL，吸头规格为200μL～300μL。 10.根据权利要求1所述的一种将微量组织细胞固定制作石蜡切片的方法，其特征在于，步骤(4)中，琼脂糖的质量分数为3％～4％；封闭包裹过程中，琼脂糖温度为50℃～60℃。
所属类别：	发明专利