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原文传递评估抗体-药物缀合物的方法

专利名称：	评估抗体-药物缀合物的方法
摘要：	本发明涉及评估抗体‑药物缀合物的方法。本公开提供了评估ADC产品的DAR的方法，这些方法提供相对于已知方法的优势。具体地，本公开的方法可以在高通量的应用中和/或在评估期间无需稀释ADC样品的情况下使用。
专利类型：	发明专利
申请人：	里珍纳龙药品有限公司
发明人：	A.斯金纳;N.库利巴
专利状态：	有效
申请日期：	2018-09-05T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-10T00:00:00+0800
申请号：	CN202311006893.6
公开号：	CN117030649A
代理机构：	中国专利代理(香港)有限公司
代理人：	李唐;杨思捷
分类号：	G01N21/33;G16B5/00;G16C20/30;B01D15/34;A61K47/68;G01N21/31;G01N30/02;G01N33/68;G01J3/427;G;B;A;G01;G16;B01;A61;G01N;G16B;G16C;B01D;A61K;G01J;G01N21;G16B5;G16C20;B01D15;A61K47;G01N30;G01N33;G01J3;G01N21/33;G16B5/00;G16C20/30;B01D15/34;A61K47/68;G01N21/31;G01N30/02;G01N33/68;G01J3/427
申请人地址：	美国纽约州.塔里敦.旧锯木厂河路777号
主权项：	1.一种确定包含抗体-药物缀合物的组合物的样品中药物与抗体之比(DAR)的方法，其包括：将所述样品放置在容器中；使探针与所述容器的底部接触；使所述探针从所述容器的底部穿过样品以预定的增量移动，从而获得通过所述样品的光的预先选择的路径长度；检测所述样品在第一光波长(λ1)处的吸光度，其中所述第一光波长是所述抗体的预定吸光度最大值；重复使所述探针相对于所述样品移动并在所述第一光波长处进行测量的步骤；从所述第一光波长处的吸光度和路径长度生成回归线，从而获得所述回归线的斜率；通过将所述回归线的斜率除以所述抗体在所述第一光波长处的消光系数来确定所述抗体的浓度；检测所述样品在第二光波长(λ2)处的吸光度，其中所述第二波长是所述药物的预定吸光度最大值；重复使所述探针相对于所述样品移动并在所述第二光波长处进行测量的步骤；从所述第二光波长处的吸光度和路径长度生成回归线，从而获得所述回归线的斜率；通过将所述回归线的斜率除以所述药物在所述第二光波长处的消光系数来确定所述药物的浓度；以及使用所述确定的药物浓度和所述确定的抗体浓度计算DAR。 2.权利要求1的方法，其包括：基于所述DAR (i)将所述组合物配制成原料药或药物制剂； (ii)将所述组合物再加工；或 (iii)使所述组合物无法用于商业发布。 3.权利要求1或2的方法，其中所述样品包括0.1μg/μL至500μg/μL的抗体-药物缀合物(ADC)。 4.权利要求1或2的方法，其中所述抗体是抗-肿瘤抗体。 5.权利要求1或2的方法，其中所述药物是促凋亡剂、细胞生长抑制剂或细胞毒性剂。 6.权利要求2的方法，其中使所述组合物无法用于商业发布包括对所述组合物进行标记或将所述组合物销毁。 7.权利要求1或2的方法，其中所述药物包括化学治疗剂。 8.权利要求7的方法，其中所述化学治疗剂包括微管靶向剂、埃博霉素、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、激酶抑制剂、核苷酸类似物、核苷酸前体类似物、肽抗生素、基于铂的药剂、类维生素A、或长春花生物碱。 9.权利要求7的方法，其中所述化学治疗剂包括放线菌素、全反式视黄酸、奥瑞斯他汀(Auiristatin)、阿扎胞苷、硫唑嘌呤、博来霉素、硼替佐米、卡铂、卡培他滨、顺铂、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、姜黄素、阿糖胞苷、柔红霉素、多西他赛、去氧氟尿苷、多柔比星、表柔比星、埃博霉素、依托泊苷、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、伊达比星、伊马替尼、伊立替康、美坦辛、氮芥、巯嘌呤、甲氨蝶呤、米托蒽醌、抗美登醇(Maytansinoid)、奥沙利铂、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、托泊替康、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春地辛、或长春瑞滨。 10.权利要求1或2的方法，其中所述抗体包括阿德木单抗、恩美曲妥珠单抗、阿仑单抗、安那妥单抗、阿珀利珠单抗、巴维昔单抗、贝伐单抗、贝妥莫单抗、博纳吐单抗、本妥昔单抗、Cantuzumab、卡妥索单抗、西妥昔单抗、达雷木单抗、地舒单抗、依决洛单抗、依匹莫单抗、伊瑞西珠、法勒珠单抗、吉妥珠单抗奥佐米星、格列珠单抗、伊匹单抗、替伊莫单抗、拉贝珠单抗、洛沃妥珠单抗、鲁卡木单抗、玛帕妥木单抗、米拉妥珠单抗、米拉图珠单抗、尼妥珠单抗、奥滨尤妥珠单抗、奥法木单抗、奥戈伏单抗、帕尼单抗、Pemtumomab、帕妥珠单抗、利妥昔单抗、西罗珠单抗、托西莫单抗、曲妥珠单抗、维妥珠单抗、或沃罗西单抗(Volociximab)。 11.一种确定包含抗体-药物缀合物的样品中药物与抗体之比(DAR)的方法，其包括：将所述样品放置在容器中；使探针与所述容器的底部接触；使所述探针从所述容器的底部穿过样品以预定的增量移动，从而获得通过所述溶液的预先选择的路径长度；检测所述样品在第一光波长(λ1)处的吸光度，其中所述第一波长是所述抗体的预定吸光度最大值；重复使所述探针相对于所述样品移动并在所述第一波长处进行测量的步骤；从所述第一波长处的吸光度和路径长度生成回归线，从而获得所述回归线的斜率；通过将所述回归线的斜率除以所述抗体在所述第一波长处的消光系数来确定所述抗体的浓度；检测所述样品在第二光波长(λ2)处的吸光度，其中所述第二波长是所述药物的预定吸光度最大值；重复使所述探针相对于所述样品移动并在所述第二波长处进行测量的步骤；从所述第二波长处的吸光度和路径长度生成回归线，从而获得所述回归线的斜率；通过将所述回归线的斜率除以所述药物在所述第二波长处的消光系数来确定所述药物的浓度；以及使用所述确定的药物浓度和所述确定的抗体浓度计算DAR。 12.权利要求11的方法，其中所述尺寸排阻色谱包括超高效液相色谱(UPLC)、反相(RP)UPLC或高效液相色谱(HPLC)。 13.权利要求11或12的方法，其中所述样品包括0.1μg/μL至500μg/μL的抗体-药物缀合物(ADC)。 14.权利要求11或12的方法，其中所述抗体是抗-肿瘤抗体。 15.权利要求11或12的方法，其中所述药物是促凋亡剂、细胞生长抑制剂或细胞毒性剂。 16.一种确定包含抗体-药物缀合物的第一样品中药物与抗体之比(DAR)的方法，其包括：通过以下测量包含所述抗体-药物缀合物的第一样品的总吸光度：将包含所述抗体-药物缀合物的第一样品施加于尺寸排阻色谱基质；检测所述第一样品在第一光波长(λ1)处的吸光度响应，其中所述第一波长是所述抗体的预定吸光度最大值；检测所述第一样品在第二光波长(λ2)处的吸光度响应，其中所述第二波长是所述药物的预定吸光度最大值；确定所述第一样品在所述第一光波长处的总吸光度和所述第一样品在所述第二光波长处的总吸光度，各个总吸光度通过对在一定时间间隔内吸光度响应的峰进行积分来计算；通过以下测量包含所述抗体的第二样品的总吸光度：将包含所述抗体的第二样品施加于尺寸排阻色谱基质；检测包含所述抗体的第二样品在所述第一光波长(λ1)处的吸光度响应；检测包含所述抗体的第二样品在所述第二光波长(λ2)处的吸光度响应；以及确定包含所述抗体的第二样品在所述第一光波长处的总吸光度和所述第二样品在所述第二光波长处的总吸光度，各个总吸光度通过对在一定时间间隔内吸光度响应的峰进行积分来计算；以及使用以下公式2计算DAR：其中是所述抗体在所述第一光波长处的消光系数；/>是所述药物在所述第一光波长处的消光系数；/>是所述药物在所述第二光波长处的消光系数；总面积/>是包含所述抗体的第二样品在所述光第一波长处的总吸光度；总面积/>是包含所述抗体的第二样品在所述第二光波长处的总吸光度；总面积/>是包含所述抗体-药物缀合物的第一样品在所述第一光波长处的总吸光度；并且总面积/>是包含所述抗体-药物缀合物的第一样品在所述第二光波长处的总吸光度。 17.权利要求16的方法，进一步包括根据具有已知浓度的所述抗体的溶液的吸光度，计算所述抗体在所述第一光波长处或在所述第二光波长处的消光系数。 18.权利要求16的方法，进一步包括根据具有已知浓度的所述药物的溶液的吸光度，计算所述药物在所述第一光波长处或在所述第二光波长处的消光系数。 19.权利要求16的方法，其中所述尺寸排阻色谱包括超高效液相色谱(UPLC)、反相(RP)UPLC或高效液相色谱(HPLC)。 20.权利要求16-19中任一项的方法，其中所述第一样品包括1μg/μL至500μg/μL的抗体-药物缀合物(ADC)。 21.权利要求16-19中任一项的方法，其中所述抗体是抗-肿瘤抗体。 22.权利要求16-19中任一项的方法，其中所述药物是促凋亡剂、细胞生长抑制剂或细胞毒性剂。 23.权利要求16-19中任一项的方法，其中对吸光度响应的峰进行积分包括检测吸光度响应的每个峰的峰肩。 24.权利要求16-19中任一项的方法，其中对吸光度响应的峰进行积分包括对高分子量(HMW)峰、低分子量(LMW)峰和主峰的面积求和。 25.权利要求16-19中任一项的方法，其中所述时间间隔是3至9分钟。
所属类别：	发明专利