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原文传递用于阻止聚合物染料-抗体缀合物之间的非特异性相互作用的组合物和方法

专利名称：	用于阻止聚合物染料-抗体缀合物之间的非特异性相互作用的组合物和方法
摘要：	本公开内容涉及包含聚合物染料的非荧光组分(例如聚合物染料的单体组分、光漂白的聚合物染料和/或包含猝灭部分的聚合物染料)的组合物，其用于例如在生物样品的流式细胞术分析中降低聚合物染料缀合物的非特异性相互作用。还提供了用于使用这样的组合物的方法和包含这样的组合物的试剂盒。
专利类型：	发明专利
申请人：	贝克曼库尔特有限公司
发明人：	弗雷德里克·蒙索尼斯;陈培华;阿伦库马尔·伊斯瓦兰;马西米利亚诺·托马苏洛;谢尔盖·古尔尼克;拉杰什·文卡特什;希瓦·兰吉尼·斯里尼瓦桑
专利状态：	有效
申请日期：	2022-02-04T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-07T00:00:00+0800
申请号：	CN202280018845.6
公开号：	CN117015711A
代理机构：	北京集佳知识产权代理有限公司
代理人：	张福誉;韩晓帆
分类号：	G01N33/533;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/533
申请人地址：	美国加利福尼亚州
主权项：	1.组合物，其用于与至少一种荧光聚合物染料一起使用以用于对生物样品染色，所述至少一种荧光聚合物染料与结合配偶体缀合，所述组合物包含：第一聚合物染料的至少一种非荧光组分；非离子表面活性剂；和生物缓冲剂；其中所述组合物与不存在所述组合物的情况下的至少一种荧光聚合物染料缀合物相比，降低了所述至少一种荧光聚合物染料缀合物的非特异性结合。 2.权利要求1所述的组合物，其中所述第一聚合物染料的非荧光组分表现出以下中的至少一者：量子产率(QY)不大于0.1、不大于0.06或不大于0.056；当被405nm激光激发时，小于约50个任意荧光单位(AFU)；以及当在405nm下被激发时，与母体荧光聚合物相比，>95％的原始最大发射强度的猝灭。 3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述第一聚合物染料的非荧光组分选自聚合物染料的单体组分、光漂白的聚合物染料、包含猝灭部分的聚合物染料和非荧光聚合物染料。 4.根据权利要求3所述的组合物，其包含聚合物染料的单体组分和光漂白的聚合物染料。 5.根据权利要求3所述的组合物，其包含聚合物染料的单体组分和包含猝灭部分的聚合物染料。 6.根据权利要求1至5所述的组合物，其中所述非离子表面活性剂是泊洛沙姆非离子表面活性剂。 7.根据权利要求1至5中所述的组合物，其中所述至少一种聚合物染料包含两种或更多种聚合物染料，每种聚合物染料与结合配偶体缀合。 8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述两种或更多种聚合物染料缀合物包含不同的聚合物染料或包含相同的聚合物染料。 9.根据权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述至少一种荧光聚合物染料是具有根据式(I)的结构的聚合物：其中：每个A独立地选自芳族共聚单体和杂芳族共聚单体；每个L是接头部分；每个M独立地选自芳族共聚单体、杂芳族共聚单体、带隙改性单体、任选经取代的亚乙基、和亚乙炔基； G1和G2独立地选自未经修饰的聚合物末端和经修饰的聚合物末端； a、c和d独立地限定所述结构内每个单元的mol％，所述单元各自可以是均匀或随机重复的，并且其中每个a为10％至100％的mol％，每个c为0至90％的mol％，并且每个d为0至25％的mol％；每个b独立地是0或1；并且 m是1至约10,000的整数。 10.根据权利要求1至9中任一项所述的组合物，其中所述至少一种荧光聚合物染料是具有根据式(XX)的结构的聚合物：其中：每个A独立地选自芳族共聚单体和杂芳族共聚单体；每个B独立地选自芳族共聚单体、杂芳族共聚单体、带隙改性单体、任选经取代的亚乙基、和亚乙炔基；每个E是独立选择的发色团、官能部分或结合配偶体； G1和G2独立地选自未经修饰的聚合物末端和经修饰的聚合物末端； L1、L2和L3是接头部分； W是水溶性部分；下标n和m独立地是1至10,000的整数，下标p是0至10,000的整数，并且下标n、m和p之和的范围为2至10,000；下标q是1、2、3或4；下标r是1、2、3或4；下标s是0、1、2或3；下标t是1或2 下标r和s之和的范围为1至4；并且 A和B随机或非随机地分布在所缀合的聚合物中。 11.根据权利要求10所述的组合物，其中L1选自磺酰胺、磺酰胺、磺内酰胺、二亚磺酰胺、酰胺、膦酰胺、膦酰胺酸酯、次膦酰胺和仲胺。 12.根据权利要求1至11中任一项所述的组合物，其中所述与所述至少一种聚合物染料缀合的结合配偶体是能够与靶分析物特异性结合的分子或分子复合物。 13.根据权利要求1至12中任一项所述的组合物，其中所述与所述至少一种聚合物染料缀合的结合配偶体选自蛋白质、亲和配体、抗体、抗体片段和寡核苷酸。 14.根据权利要求13所述的组合物，其中所述结合配偶体是单克隆或多克隆抗体。 15.根据权利要求1至14中任一项所述的组合物，其中所述结合配偶体是免疫球蛋白或免疫球蛋白的免疫活性部分。 16.根据权利要求1至15中任一项所述的组合物，其中所述结合配偶体是单链抗体、Fab、Fab’和F(ab’)2片段、Fv或Fab表达文库。 17.根据权利要求1至16中任一项所述的组合物，其中至少一种聚合物染料的单体组分包含选自二氢菲(DHP)部分和芴部分的部分。 18.根据权利要求3至17中任一项所述的组合物，其中所述至少一种聚合物染料的单体组分包含具有根据式(XXII)的化学结构的基于二氢菲(DHP)的水溶性单体：其中：每个G1、G2独立地选自卤素(F、Cl、Br、I)、C1-C6烷基和PEG；每个R2独立地选自水溶性部分、烯烃、炔烃、环烷基、卤代烷基、(杂)芳基氧基、(杂)芳基氨基、磺酰胺-PEG、膦酰胺-PEG、烷基铵盐、烷基氧基铵盐、寡聚醚铵盐、烷基磺酸盐、烷氧基磺酸盐、寡聚醚磺酸盐、磺酰胺基寡聚醚、磺酰胺、亚磺酰胺、膦酰胺酸酯、次膦酰胺、每个R3是水溶性部分；每个R4独立地选自H、烷基、PEG、水溶性部分、接头部分、发色团、羧酸胺、胺、氨基甲酸盐/酯、羧酸、羧酸酯、马来酰亚胺、经活化酯、N-羟基琥珀酰亚胺基、肼、酰肼、腙、叠氮化物、炔烃、醛、或硫醇、或其被保护基团；每个R5独立地选自H、羟基、C1-C12烷基、C2-C12烯烃、C2-C12炔烃、C3-C12环烷基、C1-C12卤代烷基、C1-C12烷氧基、C2-C18(杂)芳基氧基、C2-C18(杂)芳基氨基、C2-C12羧酸和C2-C12羧酸酯；每个Q独立地是键、NR4或-CH2；每个Z独立地是CH2、O或NR4；每个f独立地是0至50的整数；并且每个n独立地是1至20的整数。 19.根据权利要求18所述的组合物，其中G1和G2各自是卤素；每个Z是O；每个R2是H；每个n独立地是2至4；并且每个f独立地是5至20；任选地其中每个n是3。 20.根据权利要求3至19中任一项所述的组合物，其中所述至少一种聚合物染料的单体组分是具有根据式(XXIII)的化学结构的基于芴或基于咔唑的水溶性单体：其中：每个G1、G2独立地选自卤素(F、Cl、Br、I)、C1-C6烷基和PEG；每个X是C、N或Si；每个R4独立地选自H、烷基、PEG、水溶性部分、接头部分、发色团、羧酸胺、胺、氨基甲酸盐/酯、羧酸、羧酸酯、马来酰亚胺、经活化酯、N-羟基琥珀酰亚胺基、肼、酰肼、腙、叠氮化物、炔烃、醛、或硫醇、或其被保护基团；每个R5独立地选自H、羟基、C1-C12烷基、C2-C12烯烃、C2-C12炔烃、C3-C12环烷基、C1-C12卤代烷基、C1-C12烷氧基、C2-C18(杂)芳基氧基、C2-C18(杂)芳基氨基、C2-C12羧酸、C2-C12羧酸酯和C1-C12烷氧基；每个Z独立地是CH2、O或NR4；每个f独立地是0至50的整数；并且每个n独立地是1至20的整数。 21.根据权利要求20所述的组合物，其中G1和G2各自是卤素；每个Z是O；每个R2是H；每个n独立地是2至4；并且每个f独立地是5至20；任选地其中每个n是3。 22.根据权利要求3至21中任一项所述的组合物，其中所述光漂白的聚合物染料是通过将根据式(I)、(VIII)、(IX)、(X)、(XI)、(XII)、(XIII)、(XIV)、(XVIII)、(XIX)或(XX)的荧光聚合物染料暴露于紫外光照射使得其表现出以下中的至少一者来制备的：量子产率(QY)不大于0.1、不大于0.06或不大于0.056；任选地当用405nm激光激发时，小于约50个任意荧光单位(AFU)；以及当在405nm下被激发时，与母体荧光聚合物相比，>95％的原始最大发射强度的猝灭。 23.根据权利要求3至22中任一项所述的组合物，其中所述包含猝灭部分的聚合物染料包含根据式(XX)的结构：其中：每个A独立地选自芳族共聚单体和杂芳族共聚单体；每个B独立地选自芳族共聚单体、杂芳族共聚单体、带隙改性单体、任选经取代的亚乙基、和亚乙炔基；每个E是独立选择的发色团、官能部分或猝灭部分，其中至少一个或更多个E是猝灭部分； G1和G2独立地选自未经修饰的聚合物末端和经修饰的聚合物末端； L1、L2和L3是接头部分； W是水溶性部分；下标n是1至10,000的整数，下标m是1至25的整数，下标p是0至10,000的整数，并且下标n、m和p之和的范围为2至10,000；下标q是1、2、3或4；下标r是1、2、3或4；下标s是0、1、2或3；下标t是1或2 下标r和s之和的范围为1至4； A和B在所缀合的聚合物中随机或非随机分布；并且 E是猝灭部分；任选地其中所述包含猝灭部分的聚合物染料表现出不大于0.1的量子产率；进一步任选地，其中所述包含猝灭部分的聚合物染料表现出小于50个AFU的荧光谱。 24.根据权利要求23所述的组合物，其中所述猝灭部分选自Dabcyl、Dabsyl、DYQ425、DYQ505、BHQ1、QSY7、QSY9、QSY35和TAMRA猝灭部分，并且任选地其中m＝2至20、3至15或5至8。 25.根据权利要求5至24中任一项所述的组合物，其中所述非离子表面活性剂是聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物。 26.根据权利要求25所述的组合物，其中所述非离子表面活性剂包含根据式(XXI)的结构：其中每个a独立地为2至130，并且b为15至67。 27.根据权利要求1至26中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含多种荧光聚合物染料缀合物，并且所述组合物显著降低了所述多种荧光聚合物染料缀合物之间的非特异性结合。 28.权利要求1至27中任一项所述的组合物，其还包含两性离子表面活性剂。 29.用于检测样品中分析物的方法，其包括：将至少一种聚合物染料缀合物添加至根据权利要求1至28中任一项所述的组合物以形成聚合物染料缀合物组合物；使怀疑包含分析物的生物样品与所述聚合物染料缀合物组合物接触以与所述分析物形成荧光聚合物染料缀合物复合物；将可激发至少一种荧光聚合物染料缀合物复合物的光源施加于所述样品；以及检测从所述荧光聚合物染料缀合物复合物发射的光。 30.根据权利要求29所述的方法，其中所述生物样品选自血液、骨髓、脾细胞、淋巴细胞、骨髓吸出物、尿液、血清、唾液、脑脊液、尿液、羊水、间质液、粪便、黏液或组织。 31.根据权利要求29或30所述的方法，其中所述生物样品是血液样品。 32.根据权利要求29至31中任一项所述的方法，其中所述生物样品是全血。 33.根据权利要求32所述的方法，其中所述生物样品包含全血的一种或更多种细胞。 34.根据权利要求33所述的方法，其中所述全血的一种或更多种细胞是红细胞、白细胞、淋巴细胞、吞噬细胞、单核细胞、巨噬细胞、粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、血小板或者具有一种或更多种可检测标志物的任何细胞。 35.根据权利要求29至34中任一项所述的方法，其中所述生物样品来自细胞培养物。 36.根据权利要求29至35中任一项所述的方法，其中来自所述光源的光的波长为约340nm至约800nm、或约340nm至约450nm。 37.根据权利要求36所述的方法，其中所发射的光的波长为约400nm至约800nm。 38.根据权利要求29至37中任一项所述的方法，其中所述检测光还包括通过流式细胞术进行分析以获得第一流式细胞术图；其中当与包括使所述生物样品与不含所述非离子表面活性剂并且不含所述第一聚合物染料的非荧光组分的组合物接触而获得的第二流式细胞术图相比时，所述第一流式细胞术图表现出由以下组成的组中的一者或更多者：聚合物染料缀合物的非特异性相互作用降低；和聚合物染料缀合物的聚集减少。 39.试剂盒，其包含根据权利要求1至28中任一项所述的组合物，其中所述试剂盒包含单独的容器，所述单独的容器包含所述第一聚合物染料的一种或更多种非荧光组分；和所述至少一种荧光聚合物染料缀合物。 40.根据权利要求39所述的试剂盒，其还在所述包含所述一种或更多种非荧光组分的容器中包含非离子表面活性剂。 41.试剂盒，其包含根据权利要求1至28中任一项所述的组合物，其中所述试剂盒包含在一个容器中的所述第一聚合物染料的非荧光组分中的一种或更多种和所述非离子表面活性剂；以及在单独的容器中的所述至少一种荧光聚合物染料缀合物。 42.试剂盒，其包含根据权利要求1至28中任一项所述的组合物，其中所述试剂盒包含在一个容器中的所述第一聚合物染料的非荧光组分中的两种或更多种；以及在单独容器中的所述至少一种荧光聚合物染料缀合物。
所属类别：	发明专利