详情

原文传递用于在生物样品中降低荧光聚合物缀合物与细胞之间的非特异性相互作用的添加剂

专利名称：	用于在生物样品中降低荧光聚合物缀合物与细胞之间的非特异性相互作用的添加剂
摘要：	本公开内容涉及用于在生物样品中降低或消除至少一种染料缀合物与细胞的非特异性结合的方法和组合物。在染料缀合物与血液样品接触之前、期间或之后，使染料缀合物与至少一种两性离子表面活性剂或阴离子表面活性剂接触，导致染料缀合物与生物样品中细胞的非特异性结合显著降低。
专利类型：	发明专利
申请人：	贝克曼库尔特有限公司
发明人：	拉杰什·文卡特什;希瓦·兰吉尼·斯里尼瓦桑;瓦莱丽·马利特德西涅;西尔万·蒙索奥;杰拉尔丁·比歇勒
专利状态：	有效
申请日期：	2021-11-12T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-03T00:00:00+0800
申请号：	CN202180088861.8
公开号：	CN116997797A
代理机构：	北京集佳知识产权代理有限公司
代理人：	张珊珊;刘振佳
分类号：	G01N33/569;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/569
申请人地址：	美国加利福尼亚州
主权项：	1.用于在生物样品中降低或消除至少一种聚合物染料缀合物的非特异性结合的方法，所述方法包括：在所述聚合物染料缀合物与血液样品接触之前、期间或之后，使所述至少一种聚合物染料缀合物与至少一种两性离子表面活性剂或阴离子表面活性剂接触，所述接触导致所述至少一种聚合物染料缀合物与所述生物样品中细胞的非特异性结合降低。 2.根据权利要求1所述的方法，其中所述非特异性结合降低包括与所述生物样品中白细胞的非特异性结合降低；任选地，其中所述生物样品是血液样品。 3.根据权利要求2所述的方法，其中所述白细胞选自单核细胞和粒细胞。 4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其包括在使所述聚合物染料缀合物与所述生物样品接触之前，使所述表面活性剂与所述生物样品接触。 5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其包括在使所述聚合物染料缀合物和表面活性剂与所述生物样品接触之前，使所述聚合物染料缀合物与所述表面活性剂接触。 6.根据权利要求1所述的方法，其中所述表面活性剂是下式的化合物： R1′[CO-X(CH2)j]g-[N+(R2’)(R3’)]k-(CH2)f-[CH(OH)CH2]h-Y-，其中 R1’是饱和或不饱和C5-24烷基； X是NH、NR4’，其中R4’是C1-4烷基、O或S； j是1至10的整数； g是0或1； R2’和R3’独立地是C1-4烷基； k是0或1；羟基任选地被甲基、乙基、羟甲基或羟乙基取代； f是0至4的整数； h是0或1；并且 Y是COO、SO3、OPO(OR5’)O或P(O)(OR5’)O，其中R5’是H或C1-4烷基。 7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述表面活性剂是下式的两性离子表面活性剂化合物： R1′[CO-X(CH2)j]g-N+(R2’)(R3’)-(CH2)f-[CH(OH)CH2]h-Y-，其中： R1’是饱和或不饱和C5-24烷基； X是NH或NR4’，其中R4’是C1-4烷基、O或S； j是1至10的整数； g是0或1； R2’和R3’独立地是C1-4烷基；羟基任选地被甲基、乙基、羟甲基或羟乙基取代； f是1至4的整数； h是0或1；并且 Y是COO、SO3、OPO(OR5’)O或P(O)(OR5’)O，其中R5’是H或C1-4烷基残基。 8.权利要求7所述的方法，其中所述两性离子表面活性剂是下式的化合物： R1′-N+(CH3)2-CH2COO-； R1′-CO-NH(CH2)3-N+(CH3)2-CH2COO-； R1′-N+(CH3)2-CH2CH(OH)CH2SO3-；或 R1′-CO-NH-(CH2)3-N+(CH3)2-CH2CH(OH)CH2SO3- 9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述表面活性剂选自杏仁油酰胺丙基甜菜碱、野杏油酰胺丙基甜菜碱、鳄梨油酰胺丙基甜菜碱、巴巴苏油酰胺丙基甜菜碱、山嵛酰胺丙基甜菜碱、山嵛基甜菜碱、低芥酸菜子油酰胺丙基甜菜碱、辛酰基/癸基酰胺丙基甜菜碱、肉碱、鲸蜡基甜菜碱、椰油酰胺乙基甜菜碱、椰油酰胺丙基甜菜碱、椰油酰胺丙基羟基磺基甜菜碱、椰油甜菜碱、椰油羟基磺基甜菜碱、椰油/油酰胺丙基甜菜碱、椰油磺基甜菜碱、癸基甜菜碱、二羟乙基油基甘氨酸盐、二羟乙基大豆甘氨酸盐、二羟乙基硬脂基甘氨酸盐、二羟乙基牛油甘氨酸盐、二甲基硅氧烷丙基PG-甜菜碱、芥酸酰胺丙基羟基磺基甜菜碱、氢化牛油甜菜碱、异硬脂酰胺丙基甜菜碱、月桂酰胺丙基甜菜碱、月桂基甜菜碱、月桂基羟基磺基甜菜碱、月桂基磺基甜菜碱、牛奶酰胺丙基甜菜碱、牛奶酰胺丙基甜菜碱、肉豆蔻酰胺丙基甜菜碱、肉豆蔻基甜菜碱、油酰胺丙基甜菜碱、油酰胺丙基羟磺基甜菜碱、油基甜菜碱、橄榄油酰胺丙基甜菜碱、棕榈油酰胺丙基甜菜碱、棕榈酰胺丙基甜菜碱、棕榈酰肉碱、棕榈仁油酰胺丙基甜菜碱、聚四氟乙烯乙酰氧丙基甜菜碱、蓖麻醇酰胺丙基甜菜碱、芝麻酰胺丙基甜菜碱、大豆酰胺丙基甜菜碱、硬脂酰胺丙基甜菜碱、硬脂基甜菜碱、牛油酰胺丙基甜菜碱、牛油酰胺丙基羟基磺基甜菜碱、牛油甜菜碱、牛油二羟乙基甜菜碱、十一碳酰胺丙基甜菜碱和小麦胚芽酰胺丙基甜菜碱。 10.权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述表面活性剂是月桂基甜菜碱。 11.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述表面活性剂是下式的阴离子表面活性剂化合物： R1′[CO-X(CH2)j]g-(CH2)f-[CH(OH)CH2]h-Y-，其中 R1’是饱和或不饱和C5-24烷基； X是NH、NR4’，其中R4’是C1-4烷基、O或S； j是1至10的整数； g是0或1；羟基任选地被甲基、乙基、羟甲基或羟乙基取代； f是0至4的整数； h是0或1；并且 Y是COO、SO3、OPO(OR5’)O或P(O)(OR5’)O，其中R5’是H或C1-4烷基，并且其中所述阴离子表面活性剂可以是酸性形式或其钠盐或钾盐形式。 12.根据权利要求11所述的方法，其中所述阴离子表面活性剂是根据下式的化合物： R1’-CO-N(CH3)-CH2-COO-；或 R1′-CO-N(CH3)-CH2-SO3-，并且所述阴离子表面活性剂是酸性形式或其钠盐或钾盐，其中 R1’是饱和或不饱和C5-24烷基。 13.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述阴离子表面活性剂选自N-月桂酰肌氨酸、月桂酰肌氨酸钠、棕榈酰肌氨酸钠、硬脂酰肌氨酸钠、N-甲基-N-(1-氧代十四烷基)-甘氨酸钠盐、己酰肌氨酸钠、辛酰肌氨酸钠、N-甲基-N-(1-氧代-9-十八烯-1-基)-甘氨酸、钠盐、油酰肌氨酸钠和亚油酰肌氨酸钠。 14.根据权利要求13所述的方法，其中所述阴离子表面活性剂是N-月桂酰肌氨酸或其盐。 15.根据权利要求1至14所述的方法，其中所述聚合物染料缀合物包含与聚合物染料缀合的结合配偶体，所述聚合物染料具有式III的结构：其中，每个A独立地选自芳族共聚单体和杂芳族共聚单体；每个任选的M独立地选自芳族共聚单体、杂芳族共聚单体、带隙改性单体、任选经取代的亚乙基、以及亚乙炔基，并且沿所述聚合物主链均匀或随机分布；每个任选的L是接头部分； G1和G2各自独立地选自未经改性的聚合物末端和经改性的聚合物末端； a、c和d限定每个单元的摩尔％，所述单元各自可以是均匀或随机重复的，并且其中每个a为10％至100％的摩尔％，每个c为0至90％的摩尔％，并且每个d为0至25％的摩尔％；每个b独立地是0或1；并且每个m是1至约10,000的整数。 16.根据权利要求15所述的方法，其中A选自DHP部分、芴部分、以及DHP部分和芴部分。 17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述至少一种聚合物染料缀合物包含与聚合物缀合的结合配偶体，所述聚合物具有根据式I的结构：其中每个X独立地是C或Si；每个Y独立地是CR1R2或SiR1R2；每个R1独立地是烷基铵盐、烷氧基铵盐、低聚醚铵盐、烷基磺酸盐、烷氧基磺酸盐、低聚醚磺酸盐、低聚醚磺酰胺基或以下部分：每个R2独立地是H、烷基、烯基、炔基、环烷基、卤代烷基、烷氧基、(杂)芳氧基、芳基、(杂)芳氨基、PEG基团、烷基铵盐、烷氧基铵盐、低聚醚铵盐、烷基磺酸盐、烷氧基磺酸盐、低聚醚磺酸盐、低聚醚磺酰胺基或以下部分：每个R3独立地选自H、烷基、烯烃、炔烃、环烷基、卤代烷基、烷氧基、(杂)芳氧基、芳基、(杂)芳氨基和PEG基团；每个Z独立地选自C、O和N；每个Q独立地选自键、NH、NR4和CH2；并且每个下标n独立地是0至20的整数；每个M是能够改变聚合物带隙的单元，并且沿所述聚合物主链均匀或随机分布； L是接头； G1和G2各自独立地选自氢、卤素、炔烃、任选经取代的芳基、任选经取代的杂芳基、卤素取代的芳基、甲硅烷基、重氮盐、三氟甲磺酸酯/盐、乙酰氧基、叠氮化物、磺酸酯/盐、磷酸酯/盐、硼酸取代的芳基、硼酸酯取代的芳基、硼酸酯、硼酸、任选经取代的二氢菲(DHP)、任选经取代的芴、芳基或杂芳基，其被一个或更多个侧链取代，所述侧链被选自以下的官能团封端：胺、氨基甲酸酯/盐、羧酸、羧酸酯/盐、马来酰亚胺、经活化酯、N-羟基琥珀酰亚胺基、肼、酰肼、腙、叠氮化物、炔烃、醛、硫醇及其被保护基团； a、c和d限定所述结构内每个单元的摩尔％，所述单元各自可以是均匀或随机重复的，并且其中每个a为10％至100％的摩尔％，每个c为0至90％的摩尔％，并且每个d为0至25％的摩尔％；每个b独立地是0或1； m是1至约10,000的整数；并且每个n独立地是1至20的整数。 18.根据权利要求17所述的方法，其中 L是沿所述聚合物主链均匀或随机分布的芳基或杂芳基，并且被一个或更多个侧链取代，所述侧链被与结合配偶体缀合的选自以下的官能团封端：胺、氨基甲酸酯/盐、羧酸、羧酸酯/盐、马来酰亚胺、经活化酯、N-羟基琥珀酰亚胺基、肼、酰肼、腙、叠氮化物、炔烃、醛、硫醇及其被保护基团。 19.根据权利要求15至18中任一项所述的方法，其中所述结合配偶体是能够与靶分析物特异性结合的分子或分子复合物。 20.根据权利要求15至19中任一项所述的方法，其中所述结合配偶体是蛋白质、亲和配体、抗体或抗体片段。 21.根据权利要求20所述的方法，其中所述结合配偶体选自单克隆抗体、多克隆抗体、免疫球蛋白、免疫球蛋白的免疫活性部分、单链抗体、Fab片段、Fab’片段和F(ab’)2片段以及scFv片段。 22.组合物，其包含聚合物染料缀合物；水性缓冲液；以及两性离子表面活性剂或阴离子表面活性剂。 23.根据权利要求22所述的组合物，其还包含非聚合物染料缀合物。 24.根据权利要求22或23所述的组合物，其中所述两性离子表面活性剂或阴离子表面活性剂的浓度低于临界胶束浓度(CMC)。 25.根据权利要求24所述的组合物，其中所述表面活性剂的浓度为0.05％至0.25％(w/v)、0.06％至0.20％(w/v)、或0.08％至0.16％(w/v)。 26.根据权利要求22至25中任一项所述的组合物，其中所述水性缓冲液包含一种或更多种另外的添加剂，所述另外的添加剂选自蛋白质稳定剂、防腐剂和另外的表面活性剂。 27.根据权利要求22至26中任一项所述的组合物，其中与在没有两性离子表面活性剂或阴离子表面活性剂的情况下所述聚合物染料缀合物与所述样品接触时所述聚合物染料缀合物与所述样品中细胞的非特异性结合相比，在将所述组合物与生物样品接触之后，所述聚合物染料缀合物表现出与所述样品中细胞的非特异性结合降低。 28.根据权利要求27所述的组合物，其中所述样品是血液样品，并且所述细胞是选自单核细胞和粒细胞的白细胞。 29.根据权利要求22至28中任一项所述的组合物，其中所述表面活性剂是下式的化合物： R1′[CO-X(CH2)j]g-[N+(R2′)(R3′)]k-(CH2)f-[CH(OH)CH2]h-Y-，其中 R1’是饱和或不饱和C5-24烷基； X是NH、NR4’，其中R4’是C1-4烷基、O或S； j是1至10的整数； g是0或1； R2’和R3’独立地是C1-4烷基； k是0或1；羟基任选地被甲基、乙基、羟甲基或羟乙基取代； f是0至4的整数； h是0或1；并且 Y是COO、SO3、OPO(OR5’)O或P(O)(OR5’)O，其中R5’是H或C1-4烷基，并且当k＝0时，所述表面活性剂可以是酸性形式、或其钠盐或钾盐。 30.根据权利要求22至29中任一项所述的组合物，其中所述聚合物染料缀合物包含与聚合物染料缀合的结合配偶体，所述聚合物染料具有式III的结构：其中，每个A独立地选自芳族共聚单体和杂芳族共聚单体；每个任选的M独立地选自芳族共聚单体、杂芳族共聚单体、带隙改性单体、任选经取代的亚乙基、以及亚乙炔基，并且沿所述聚合物主链均匀或随机分布；每个任选的L是接头部分； G1和G2各自独立地选自未经改性的聚合物末端和经改性的聚合物末端； a、c和d限定每个单元的摩尔％，所述单元各自可以是均匀或随机重复的，并且其中每个a为10％至100％的摩尔％，每个c为0至90％的摩尔％，并且每个d为0至25％的摩尔％；每个b独立地是0或1；并且每个m是1至约10,000的整数。 31.根据权利要求22至30中任一项所述的组合物，其中所述聚合物染料缀合物包含与聚合物染料缀合的结合配偶体，所述聚合物染料具有根据式I的结构：其中每个X独立地是C或Si；每个Y独立地是CR1R2或SiR1R2；每个R1独立地是烷基铵盐、烷氧基铵盐、低聚醚铵盐、烷基磺酸盐、烷氧基磺酸盐、低聚醚磺酸盐、低聚醚磺酰胺基或以下部分：每个R2独立地是H、烷基、烯基、炔基、环烷基、卤代烷基、烷氧基、(杂)芳氧基、芳基、(杂)芳氨基、PEG基团、烷基铵盐、烷氧基铵盐、低聚醚铵盐、烷基磺酸盐、烷氧基磺酸盐、低聚醚磺酸盐、低聚醚磺酰胺基或以下部分：每个R3独立地选自H、烷基、烯烃、炔烃、环烷基、卤代烷基、烷氧基、(杂)芳氧基、芳基、(杂)芳氨基和PEG基团；每个Z独立地选自C、O和N；每个Q独立地选自键、NH、NR4和CH2；并且每个下标n独立地是0至20的整数；每个M是能够改变聚合物带隙的单元，并且沿所述聚合物主链均匀或随机分布； L是接头； G1和G2各自独立地选自氢、卤素、炔烃、任选经取代的芳基、任选经取代的杂芳基、卤素取代的芳基、甲硅烷基、重氮盐、三氟甲磺酸酯/盐、乙酰氧基、叠氮化物、磺酸酯/盐、磷酸酯/盐、硼酸取代的芳基、硼酸酯取代的芳基、硼酸酯、硼酸、任选经取代的二氢菲(DHP)、任选经取代的芴、芳基或杂芳基，其被一个或更多个侧链取代，所述侧链被选自以下的官能团封端：胺、氨基甲酸酯/盐、羧酸、羧酸酯/盐、马来酰亚胺、经活化酯、N-羟基琥珀酰亚胺基、肼、酰肼、腙、叠氮化物、炔烃、醛、硫醇及其被保护基团； a、c和d限定所述结构内每个单元的摩尔％，所述单元各自可以是均匀或随机重复的，并且其中每个a为10％至100％的摩尔％，每个c为0至90％的摩尔％，并且每个d为0至25％的摩尔％；每个b独立地是0或1； m是1至约10,000的整数；并且每个n独立地是1至20的整数。