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原文传递一种测定水产品中的酰胺醇类和己烯雌酚残留量的方法

专利名称：	一种测定水产品中的酰胺醇类和己烯雌酚残留量的方法
摘要：	本发明公开了一种测定水产品中的酰胺醇类和己烯雌酚残留量的方法，其用于同时检测分析样品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、棕榈氯霉素、琥珀氯霉素、氟苯尼考胺和己烯雌酚的含量，具体是先分别准确称取适量经纯度折算和盐形式换算后的各兽药标准物质并配制系列标准工作曲线溶液，同时取水产品的组织样本捣碎、均质后用氨化乙酸乙酯溶液多次提取，合并收集氨化乙酸乙酯提取液并减压蒸发至干得到浓缩残渣，接着将浓缩残渣、水和正己烷混合和离心后得到水相，将水相经过滤膜处理得到待测样；取采系列标准工作曲线溶液和待测样用LC‑MS/MS测定获得水产品中兽药的残留量。本方法操作简单、高效、回收率高、重现性好，经处理后的待测样品能够直接用LC‑MS/MS进行检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	广西壮族自治区水产科学研究院
发明人：	黄鸾玉;吴祥庆;蒙源;江林源;林勇
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-14T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-24T00:00:00+0800
申请号：	CN202311017452.6
公开号：	CN117110496A
代理机构：	南宁深之意专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	徐国华
分类号：	G01N30/06;G01N30/34;G01N30/60;G01N30/72;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/60;G01N30/72
申请人地址：	530021 广西壮族自治区南宁市青山路8号
主权项：	1.一种测定水产品中的酰胺醇类和己烯雌酚残留量的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）配制混合标准工作溶液：称取CAP、TAP、FF、CAPP、CAPS、FFA和DES的标准物质，用甲醇分别配制得到浓度为100µg/mL的单标储备液，移取CAP和DES的单标储备液各50µL以及FF、FFA、TAP、CAPS和CAPP的单标储备液各250µL置于50mL棕色容量瓶中，再用甲醇水溶液定容，混合均匀后得到混合标准工作溶液，接着从混合标准工作溶液中分别移取50µL、100µL、200µL、500µL、1000µL、2000µL、5000µL的混合标准工作溶液于一系列10mL容量瓶中，配制成CAP和DES的浓度为0.5µg/L、1.0µg/L、2.0µg/L、5.0µg/L、10.0µg/L、20.0µg/L、50.0µg/L，FF、FFA、TAP、CAPS和CAPP的浓度为2.5µg/L、5.0µg/L、10.0µg/L、25.0µg/L、50.0µg/L、100.0µg/L、250.0µg/L的系列标准工作曲线溶液；（2）样品处理：取水产品的组织置于捣碎机中捣碎再均质后得到待测试的试样品，称取4.95～5.05g的试样品置于离心管中进行提取处理；所述提取处理的程序为先向离心管中加入15～30mL氨化乙酸乙酯后振荡提取8～15min，然后在4000r/min的条件下离心5～10min，吸取氨化乙酸乙酯提取液过无水硫酸钠柱后置于蒸发管中；接着将装有样品残渣的离心管按照提取处理的程序重复提取一次，合并氨化乙酸乙酯提取液并减压蒸发至干得到浓缩残渣；向装有浓缩残渣的蒸发管中依次加入1mL水和5mL正己烷溶解浓缩残渣，然后漩涡混匀1min；将溶解液转移到具塞玻璃离心管中，再在8000r/min的条件下离心5min，弃去上层正己烷后再加入5mL正己烷，并且漩涡混匀1min后在8000r/min的条件下离心5min，弃去上层正己烷溶液得到水相，再将水相经过滤膜处理后得到待测样；（3）取步骤（1）中得到的系列标准工作曲线溶液依次进行LC-MS/MS测定并绘制标准工作曲线；取步骤（2）中得到的待测样进行LC-MS/MS测定，根据以下公式计算待测样中CAP、TAP、FF、CAPP、CAPS、FFA和DES的含量：X=c×V/m，其中X为水产品样品中兽药的含量，µg/kg；c为待测样中兽药的含量µg/mL；m为水产品样品的质量，kg；V为待测样的体积，mL；所述LC-MS/MS测定中的色谱条件为色谱柱为C18柱，柱温为30～35℃，样品室温度不高于22℃，进样量为20µL，甲醇为流动相A，水为流动相B，质量分数为0.1%的甲酸水溶液为流动相C，APs和DES的上机测定分正负离子模式，其中FFA为正离子模式，CAP、TAP、FF、CAPP、CAPS和DES为负离子模式；所述LC-MS/MS测定中的质谱条件为以水:甲醇=50:50作为流动相等度洗脱，在5µL/min流速下，用ESI源的多反应监测模式分别进行正离子和负离子扫描，正离子模式喷雾电压为3500V～3550V，负离子模式喷雾电压为2500V，离子传输管温度为350℃，蒸发温度为300℃，碰撞气压力为1.5mTorr，鞘气流速为35bar，辅助气流速为10bar，扫描的质量范围为m/z100~700。 2.根据权利要求1所述的测定水产品中的酰胺醇类和己烯雌酚残留量的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的甲醇水溶液的体积分数为25%。 3.根据权利要求1所述的测定水产品中的酰胺醇类和己烯雌酚残留量的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的氨化乙酸乙酯是按照氨水和乙酸乙酯的体积比为3:97的比例混合得到的。 4.根据权利要求1所述的测定水产品中的酰胺醇类和己烯雌酚残留量的方法，其特征在于：步骤（2）中称取4.95～5.05g的试样品置于聚丙烯离心管中进行提取处理；将所述的浓缩残渣溶解液置于具塞玻璃离心管中进行处理。 5. 根据权利要求1所述的测定水产品中的酰胺醇类和己烯雌酚残留量的方法，其特征在于：步骤（2）中，将水相经过0.22 μm的滤膜处理后得到待测样。 6.根据权利要求1所述的测定水产品中的酰胺醇类和己烯雌酚残留量的方法，其特征在于：步骤（3）中所述正离子模式的梯度洗脱程序如图1所示，所述的负离子模式的梯度洗脱程序如图2所示，负离子模式的流速为0.3mL/min，正离子模式的流速为0.2mL/min。 7.根据权利要求1所述的测定水产品中的酰胺醇类和己烯雌酚残留量的方法，其特征在于：步骤（3）中所述的质谱条件还包括如图3所示的质谱参数。
所属类别：	发明专利