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原文传递一种用于检测马传染性贫血病毒抗体的试剂盒

专利名称：	一种用于检测马传染性贫血病毒抗体的试剂盒
摘要：	本发明公开了一种用于检测马传染性贫血病毒抗体的试剂盒，属于动物病毒抗体检测领域。所述试剂盒包括马传染性贫血病毒p26‑gp90重组蛋白、鼠IgG和羊抗鼠IgG，所述马传染性贫血病毒p26‑gp90重组蛋白由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列组成。利用本发明的试剂盒检测马传染性贫血病毒抗体，方便快捷，灵敏度高，与其他病原体无交叉反应，特异性强，具有巨大的临床意义和和广泛的应用前景。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	杭州爱谨生物科技有限公司
发明人：	李晓光;何坚锋;王哲侃
专利状态：	有效
申请日期：	2020-12-14T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-17T00:00:00+0800
申请号：	CN202311051165.7
公开号：	CN117074671A
代理机构：	杭州信与义专利代理有限公司
代理人：	马育妙
分类号：	G01N33/569;G01N33/558;G01N33/68;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/68
申请人地址：	310000 浙江省杭州市钱塘区白杨街道20号大街578号1幢1楼
主权项：	1.一种用于检测马传染性贫血病毒抗体的试剂盒，其特征在于，包括马传染性贫血病毒p26-gp90重组蛋白、鼠IgG和羊抗鼠IgG，所述马传染性贫血病毒p26-gp90重组蛋白由SEQID NO.1所示氨基酸序列组成。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒利用双抗原夹心金标法检测马传染性贫血病毒抗体。 3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述所述试剂盒包括双抗原夹心金标法检测条，所述检测条的制备方法如下： S1，分别制备马传染性贫血病毒p26-gp90重组蛋白胶体金复合物和鼠IgG胶体金复合物； S2，将所述马传染性贫血病毒p26-gp90重组蛋白胶体金复合物和鼠IgG胶体金复合物混合，制备金标垫； S3，利用马传染性贫血病毒p26-gp90重组蛋白作为检测线，利用羊抗鼠IgG作为质控线，划在硝酸纤维素膜上； S4，将滤纸、含有硝酸纤维素膜的聚酯板、金标垫和样本垫安装在底板上，其中滤纸叠加一部分压在聚酯板上，聚酯板叠加一部分压在金标垫上，金标垫叠加一部分压在样本垫上，在聚酯板上分别有测试区和质控区，测试区有检测线，质控区有质控线，检测线靠近金标垫，质控线靠近滤纸，即制备得到检测条。 4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述马传染性贫血病毒p26-gp90重组蛋白胶体金复合物的制备方法如下：取胶体金溶液100mL放入烧杯中，搅拌加入0.2M K2CO3调节金水pH至6.5，搅拌后加入1.5mg纯化后的马传染性贫血病毒p26-gp90重组蛋白，室温搅拌15min，加入1mL 10％BSA溶液，室温搅拌15min后12000rpm离心10min，将上清小心吸出弃去，沉淀用金标稀释液定容至1mL，所述金标稀释液包括20mM Tris，1％BSA，0.03％Proclin300，pH8.0。 5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述胶体金溶液的制备方法如下：在三角烧瓶中加入1000mL超纯水，在磁力加热搅拌器上加热至沸腾，然后加入10％氯金酸4mL，再加入10％柠檬酸三钠溶液6mL，继续加热沸腾5min，然后冷却至室温后用0.22μm过滤器过滤后放置4℃备用。 6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述纯化是指将所述马传染性贫血病毒p26-gp90重组蛋白过Ni柱，用洗脱缓冲液洗脱，所述洗脱缓冲液包括50mM Tris，0.2MNacl，0.5M Imidazole，pH8.0。 7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述鼠IgG胶体金复合物的制备方法如下：取胶体金溶液100mL放入烧杯中，搅拌加入0.2M K2CO3调节金水pH至6.5，搅拌后加入1mg鼠IgG，室温搅拌15min，加入1mL 10％BSA溶液，室温搅拌15min后12000rpm离心10min，将上清小心吸出弃去，沉淀用金标稀释液定容至1mL，所述金标稀释液包括20mM Tris，1％BSA，0.03％Proclin300，pH8.0。 8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，将所述鼠IgG胶体金复合物用金标稀释液稀释100倍后与所述马传染性贫血病毒p26-gp90重组蛋白胶体金复合物混合后浸泡玻璃纤维，37℃烘干4h后即制成金标垫。 9.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，用点膜稀释液稀释纯化后所述马传染性贫血病毒p26-gp90重组蛋白至0.9mg/mL做为胶体金试纸条的检测线，用相同稀释液稀释羊抗鼠IgG至0.3mg/mL做为胶体金试纸条的质控线，将上述两种稀释之后的溶液划线至硝酸纤维素膜上，37℃烘干过夜。
所属类别：	发明专利