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一种传染性法氏囊病病毒抗体竞争ELISA检测方法及试剂盒
| 专利名称： | 一种传染性法氏囊病病毒抗体竞争ELISA检测方法及试剂盒 |
| 摘要： | 本发明涉及一种传染性法氏囊病病毒抗体竞争ELISA检测方法及试剂盒，属于生物技术领域。将IBDV VP2基因优化设计，构建原核表达质粒pET28+VP2，转化大肠杆菌，重组VP2蛋白的分子量约为50kDa。用纯化的rVP2蛋白作为筛选抗原，筛选IBDV VP2单抗。用rVP2蛋白作为包被抗原，HRP‑标记的其中一株VP2单抗为竞争抗体，建立了IBDV抗体竞争ELISA检测方法(rVP2‑cELISA)。与现有的商品化的IBDV抗体检测试剂盒相比，本发明传染性法氏囊病病毒抗体竞争ELISA检测方法，耗时更短、特异性更好、检测样品范围更广、成本更低廉和生产更方便等优势，具有巨大的生产应用价值。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 江苏省农业科学院 |
| 发明人： | 欧阳伟;王永山;王晓丽;夏兴霞;钱晶;诸玉梅;王晶宇;马孙婷 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-09-09T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-11-15T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910846665.7 |
| 公开号： | CN110456047A |
| 代理机构： | 南京经纬专利商标代理有限公司 |
| 代理人： | 程斯佳 |
| 分类号： | G01N33/558(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 210014江苏省南京市钟灵街50号 |
| 主权项： | 1.一种传染性法氏囊病病毒抗体竞争ELISA检测方法，其特征在于，以保藏编号为CCTCC NO：C201966的抗传染性法氏囊病毒VP2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株1H6单克隆抗体为竞争抗体。 2.根据权利要求1所述的传染性法氏囊病病毒抗体竞争ELISA检测方法，其特征在于： 以rVP2重组VP2蛋白为包被抗原，其制备方法为：将IBDVVP2基因优化设计，根据GenBank已登录的IBDVVP2序列EU417824.1和大肠杆菌密码子的偏爱性优化设计VP2基因，将VP2基因的ATG去掉，全基因合成，定向克隆入原核表达载体pET-28a(+)中，构建原核表达质粒pET28+VP2，转化大肠杆菌Rosetta(DE3)；经IPTG诱导后，离心收集细菌，然后按照HisTrap HP说明书纯化rVP2。 3.根据权利要求2所述的传染性法氏囊病病毒抗体竞争ELISA检测方法，其特征在于：该检测方法的具体步骤为，将纯化的rVP2重组蛋白用pH9.6的碳酸盐缓冲液稀释至5μg/L，加入到酶标板，每孔100μL，4℃包被过夜，用含10％FBS的PBST封闭液满孔封闭，37℃，2h，PBST洗涤3次，每次3min，拍干；加入1:500稀释的临床样本50μL/孔96份，同时加入HRP-VP2单抗50μL/孔，HRP-VP2单抗1:20000稀释，37℃，1h，PBST洗涤5次，每次3min，拍干；加入TMB显色剂100μL/孔，暗盒显色；2M H2SO4终止，测A450值，判定结果。判定标准：PI＝100-样品OD值/阴性平均OD值x100，当PI＞50时，判为阳性；当PI≤50时，判为阴性。 4.权利要求1-3之一所述的传染性法氏囊病病毒抗体竞争ELISA检测方法的应用。 5.用权利要求1-3之一所述的传染性法氏囊病病毒抗体竞争ELISA检测方法构建的试剂盒。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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