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原文传递一种SPR传感器芯片表面抗原修饰和定量检测的方法

专利名称：	一种SPR传感器芯片表面抗原修饰和定量检测的方法
摘要：	本发明公开了一种SPR传感器芯片表面修饰抗原和定量检测方法，SPR传感器芯片表面链接抗体的方法包括，在SPR传感器芯片表面通过化学修饰的方式先形成一层巯基自组装单分子层，使芯片表层巯基化，再用N‑羟基琥珀酰亚胺（NHS）和1‑（3‑二甲氨基丙基）‑3乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）活化后将Mouse‑Anti Human IgG抗体共价固定于芯片表面，抗原能够与抗体特异性结合，将抗原结合至SPR传感器芯片表面，引起SPR传感器表面等离子共振角发生变化，从而实现待测样品中抗原含量的定量检测，并且检测下限低至28.25ng/mL。
专利类型：	发明专利
申请人：	合肥工业大学;滁州怡然传感技术研究院有限公司
发明人：	章伟;俞佳丽;王晓茹
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-30T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-24T00:00:00+0800
申请号：	CN202311103128.6
公开号：	CN117110253A
代理机构：	南京经纬专利商标代理有限公司
代理人：	朱小兵
分类号：	G01N21/552;G01N33/68;G;G01;G01N;G01N21;G01N33;G01N21/552;G01N33/68
申请人地址：	230009 安徽省合肥市屯溪路193号;
主权项：	1.一种SPR传感器芯片表面链接抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤： S1.1、采用注射泵将11-巯基十一烷酸无水乙醇溶液以稳定流速流经SPR传感器芯片，用于SPR传感器芯片表面巯基化，自组装成巯基单分子层； S1.2、采用注射泵将N-羟基琥珀酰亚胺与1-(3-二甲氨基丙基)-3乙基碳二亚胺盐酸盐溶液以稳定流速流经芯片，用于SPR传感器芯片表面羧基活化； S1.3、采用注射泵将抗体溶液以稳定流速流经芯片，用于在SPR传感器芯片表面链接IgG抗体； S1.4、屏蔽SPR传感器芯片表面非特异性结合位点。 2.根据权利要求1所述的SPR传感器芯片表面链接抗体的方法，其特征在于，步骤S1.1中，所述SPR传感器芯片表面巯基化，方法包括：取11-巯基十一烷酸加入到乙醇溶液中配置成11-巯基十一烷酸无水乙醇溶液，将SPR传感器芯片放入溶液中浸泡，室温放置，使芯片表面巯基化；将芯片取出用乙醇溶液和去离子水冲洗后，氮气吹干。 3.根据权利要求2所述的SPR传感器芯片表面链接抗体的方法，其特征在于，步骤S1.2中，所述SPR传感器芯片表面羧基活化，方法包括：将所述SPR传感器芯片放置于样品台模块并贴上聚二甲基硅氧烷PDMS流道，采用注射泵以稳定流速通入去离子水，使溶液稳定流经芯片表面，冲洗表面残留的11-巯基十一烷酸无水乙醇溶液；再以稳定流速通入磷酸盐PBS缓冲液，得到基线SPR响应信号；取1-(3-二甲氨基丙基)-3乙基碳二亚胺盐酸盐EDC和N-羟基琥珀酰亚胺NHS加入到磷酸盐缓冲液中，充分溶解后，以稳定流速通入，使所述SPR传感器芯片表面羧基充分活化；冲洗SPR传感器芯片表面。 4.根据权利要求3所述的SPR传感器芯片表面链接抗体的方法，其特征在于，步骤S1.3中，所述SPR传感器芯片表面链接IgG抗体，方法包括：取Mouse Anti-Human IgG溶液加入PBS缓冲液，形成稀释的IgG抗体溶液，将抗体溶液以稳定流速通入并流经芯片表面，使芯片表面链接上IgG抗体，冲洗SPR传感器芯片表面。 5.根据权利要求4所述的SPR传感器芯片表面链接抗体的方法，其特征在于，步骤S1.4中，所述屏蔽SPR传感器芯片表面非特异性结合位点，方法包括：取牛血清蛋白BSA加入到PBS缓冲液中，充分溶解后得到质量分数1％的BSA溶液，将BSA溶液以稳定流速通入并流SPR传感器芯片表面，将芯片表面非特异性活性位点屏蔽，再以稳定流速通入PBS缓冲液，冲洗SPR传感器芯片表面。 6.根据权利要求1至5任一项所述的SPR传感器芯片表面链接抗体的方法，其特征在于，所述稳定流速为20μl/min；所述冲洗SPR传感器芯片表面的方法包括：以所述稳定流速通入0.01M的PBS缓冲液，用于将芯片表面冲洗干净。 7.根据权利要求1至5任一项所述的SPR传感器芯片表面链接抗体的方法，其特征在于，所述SPR传感器芯片包括由内层向外层依次层叠的高折射率玻璃层、黏附层铬层和金层。 8.根据权利要求7所述的SPR传感器芯片表面链接抗体的方法，其特征在于，所述高折射率玻璃为K9玻璃，折射率为1.515；所述黏附层铬层厚度为0-4nm；所述金层厚度为40-60nm。 9.一种SPR传感器芯片表面抗原定量检测的方法，其特征在于，使用上述权利要求1至5任一项方法在SPR传感器芯片表面链接抗体后，进行SPR传感器芯片表面抗原定量检测，所述芯片表面抗原定量检测方法包括以下步骤： S2.1、采用注射泵将一系列已知浓度的抗原溶液以稳定流速流经芯片表面； S2.2、实时采集SPR传感器响应信号并转化为相应SPR共振角，根据所得SPR角和预定的标准曲线获得待测溶液中抗原的含量，进行标准曲线拟合； S2.3、进行抗原定量检测的准确度预测。 10.根据权利要求9所述的一种SPR传感器芯片表面抗原定量检测的方法，其特征在于，所述抗原为Human IgG抗原，所述抗原定量检测为IgG抗原定量检测，所述已知浓度的抗原溶液，浓度包括：10、50、100、150、200μg/ml。 11.根据权利要求10所述的一种SPR传感器芯片表面抗原定量检测的方法，其特征在于，步骤S2.2中，所述标准曲线拟合，方法包括：基于上述SPR传感器芯片表面链接抗体过程后，配制一系列已知浓度抗原，采用注射泵将抗原按从低到高浓度以稳定流速流经芯片表面，并且实时采集SPR响应信号，得到不同浓度Human IgG抗原溶液与相应SPR响应值；将SPR响应值转化为相应的SPR共振角，并采用1：1结合的Langmuir模型进行拟合得到标准曲线，所述标准曲线为不同抗原浓度与相应SPR角的拟合曲线。 12.根据权利要求11所述的一种SPR传感器芯片表面抗原定量检测的方法，其特征在于，步骤S2.3中，所述IgG抗原定量检测的准确度预测，方法包括：基于步骤S2.2得到预测抗原浓度，并与实际抗原浓度比较，计算标准曲线对抗原的预测准确度。 13.根据权利要求12所述的一种SPR传感器芯片表面抗原定量检测的方法，其特征在于，所述标准曲线为不同抗原浓度与相应SPR角的拟合曲线。
所属类别：	发明专利