详情

原文传递用于肿瘤蛋白P53基因检测的无标记双色试纸条、试剂盒及其制备方法

专利名称：	用于肿瘤蛋白P53基因检测的无标记双色试纸条、试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明属于电化学领域，涉及肿瘤蛋白P53基因检测，特别是指用于肿瘤蛋白P53基因检测的无标记双色试纸条、试剂盒及其制备方法。属于新型LFA方法，该方法将DNA杂交链式反应与测试线/控制线静电吸附原理相结合，选择普通且具有成本效益的牛血清白蛋白作为测试线，利用BSA对双链DNA和纳米金吸附能力的差异，以及不同分子在NC膜上的不同流速，完成了不同浓度下p53的检测。测试线由带正电荷的PDDA构建，以确保LFA的有效性。同时结合液体比色传感器的检测原理，利用双色显色大幅降低试纸条检出限，该传感器全程无标签，在灵敏度、选择性和实用性方面表现出较高的分析性能。第一次在侧流测试条上检测到p53基因。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	郑州轻工业大学
发明人：	任林娇;姜利英;张培;秦自瑞;杨世杰;常凌乾;张吉涛;刘春秀;闫艳霞;张庆芳
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-11T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-10T00:00:00+0800
申请号：	CN202311011821.0
公开号：	CN117030989A
代理机构：	郑州优盾知识产权代理有限公司
代理人：	冉珊敏
分类号：	G01N33/50;G01N33/574;G01N33/68;G01N33/52;C12Q1/682;C12Q1/6825;C12N15/11;G;C;G01;C12;G01N;C12Q;C12N;G01N33;C12Q1;C12N15;G01N33/50;G01N33/574;G01N33/68;G01N33/52;C12Q1/682;C12Q1/6825;C12N15/11
申请人地址：	450000 河南省郑州市高新技术产业开发区科学大道136号
主权项：	1.用于肿瘤蛋白P53基因检测的无标记双色试纸条，包括样品垫、NC膜和吸收垫，其特征在于：所述NC膜上的测试线上固定有BSA、对照线上固定有PDDA。 2.根据权利要求1所述的用于肿瘤蛋白P53基因检测的无标记双色试纸条，其特征在于：所述NC膜为经100μM柠檬酸三钠溶液洗涤后获得的；BSA为pH=9、质量浓度为300μM含有质量浓度3%蔗糖的BSA溶液；PDDA为0.01%体积浓度的PDDA溶液。 3.与权利要求1或2所述的无标记双色试纸条配套的样本缓冲液，其特征在于：包括H1溶液、H2溶液、HCR缓冲液和AuNPs溶液。 4. 根据权利要求3所述的与无标记双色试纸条配套的样本缓冲液，其特征在于：所述H1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示、H2的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。 5. 根据权利要求4所述的与无标记双色试纸条配套的样本缓冲液，其特征在于：所述H1溶液和H2溶液的浓度均为5μM、HCR缓冲液为16.7 mM CH3COONa, 0.33 M NaCl, pH 7.5AuNPs溶液中金纳米颗粒的粒径为40nm。 6. 根据权利要求4或5所述的无标记双色试纸条配套的样本缓冲液，其特征在于，制备方法如下：将5μL H1溶液、5μM H2溶液与5μL待测样品混合，加入6μLHCR缓冲液，再将孵育后的84μL AuNPs溶液加入反应体系，在室温下放置30分钟，即得样本缓冲液。 7.一种用于检测肿瘤蛋白P53基因的试纸盒，其特征在于：包括权利要求1或2所述的试纸条和权利要求4-6任一项所述的样本缓冲液。 8. 根据权利要求7所述的用于检测肿瘤蛋白P53基因的试纸盒，其特征在于，所述试纸盒的检测方法为：取100μL 样本缓冲液加入标记双色试纸条上的样品垫，室温静置3分钟，观察测试线与控制线的颜色变化。 9. 根据权利要求7所述的用于肿瘤蛋白P53基因检测的试剂盒，其特征在于，所述试纸盒的检测方法为：在样本缓冲液中加入2μL 2M的氯化钠，室温下静置30分钟，取100μL 样本缓冲液加入试纸条上的样品垫，室温静置3分钟，观察测试线与控制线的颜色变化。 10.根据权利要求7和8所述的用于肿瘤蛋白P53基因检测的试剂盒，其特征在于：所述无标记双色试纸条在待测样品中p53浓度大于10nM时，测试线出现红色条带，回归方程为y=0.00598x+1.03368，R²=0.9958，y轴表示BT/B0值，其中BT和B0分别表示使用ImageJ测量的测试线和空白线的B值；p53浓度小于10nM时，测试线出现蓝色条带，回归方程为y=-0.0272x+1.4009，R²=0.9978，y轴表示BT/B0值，其中BT和B0分别表示使用ImageJ测量的测试线和空白线的B值。
所属类别：	发明专利