详情

原文传递一种检测燕窝糖蛋白的试纸条及其制备方法

专利名称：	一种检测燕窝糖蛋白的试纸条及其制备方法
摘要：	本发明公开了一种检测燕窝糖蛋白的试纸条，它是由底板、样品垫、结合垫、反应膜和吸水纸垫组成；所述反应膜分检测区和质控区；所述检测区含有燕窝糖蛋白包被的抗体Y2；所述质控区含有IgG多克隆抗体；所述结合垫含有荧光团‑燕窝糖蛋白标记抗体Y1；所述荧光团‑燕窝糖蛋白标记抗体Y1是燕窝糖蛋白标记抗体Y1偶联在荧光团表面制备而成的偶联物。本发明试纸条可以准确检测燕窝糖蛋白，能够鉴别燕窝的真伪，同时也可以评价燕窝的质量。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	中山火炬职业技术学院
发明人：	不公告发明人
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-09T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-05T00:00:00+0800
申请号：	CN201910735574.6
公开号：	CN110412296A
代理机构：	成都高远知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	李高峡;张娟
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	528400 广东省中山市火炬开发区中山港大道侧
主权项：	1.一种检测燕窝糖蛋白的试纸条，其特征在于：它是由底板、样品垫、结合垫、反应膜和吸水纸垫组成；所述反应膜分检测区和质控区；所述检测区含有燕窝糖蛋白包被的抗体Y2；所述质控区含有IgG多克隆抗体；所述结合垫含有荧光团-燕窝糖蛋白标记抗体Y1；所述荧光团-燕窝糖蛋白标记抗体Y1是燕窝糖蛋白标记抗体Y1偶联在荧光团表面制备而成的偶联物。 2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述底板为PVC底板；所述样品垫、结合垫、反应膜和吸水纸垫从左至右依次黏贴在PVC底板上；所述反应膜中检测区在左，质控区在右。 3.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述结合垫是经处理液处理后的结合垫；所述处理是将处理液按0.1～0.5mL/cm2滴涂于结合垫，再在37～52℃干燥6～12h；所述处理液是由1～10体积份缓冲液，10～100重量份蛋白质，1～50重量份表面活性剂，10～200重量份糖和1-5重量份防腐剂混合而成。 4.根据权利要求3所述的试纸条，其特征在于：所述处理液是由5体积份缓冲液，50重量份蛋白质，25重量份表面活性剂，100重量份糖和2.5重量份防腐剂混合而成。 5.根据权利要求3或4所述试纸条，其特征在于：所述缓冲液是浓度10mmol/L，pH 0.01的磷酸盐缓冲液；所述蛋白质为牛血清白蛋白，所述糖为海藻糖或葡聚糖，所述表面活性剂为吐温20；所述防腐剂为叠氮钠。 6.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述结合垫每1cm2含荧光团-燕窝糖蛋白标记抗体Y1 50～500ng；所述检测区每1cm2含燕窝糖蛋白包被的抗体Y2 50～500ng；所述质控区每1cm2含IgG多克隆抗体100～1000ng。 7.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：所述荧光团选自荧光微球，量子点，荧光蛋白，鲁米诺或Cy5；所述IgG多克隆抗体为羊抗兔IgG多克隆抗体；所述反应膜为硝酸纤维素膜，优选：Millipore 135的硝酸纤维素膜。 8.一种权利要求1所述的荧光团-燕窝糖蛋白标记抗体Y1的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤： 1)取荧光团，用2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲液清洗后，再加2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲液重悬，得重悬液； 2)取重悬液，加1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶液和N-羟基硫代琥珀酰亚胺溶液振荡30min，加磷酸缓冲盐溶液清洗，取下层沉淀得活化荧光团； 3)取活化荧光团，用磷酸缓冲盐溶液重悬，再加燕窝糖蛋白标记抗体Y1振荡2～16h，最后加入封闭剂，混匀，静置8-12h，即得。 9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：所述清洗是离心清洗，共离心清洗两次。 10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：步骤1)所述2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲液浓度为50mmol/L，pH值为6.0；所述重悬液中荧光团浓度为2.5mg/ml。 11.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：步骤2)所述重悬液、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶液和N-羟基硫代琥珀酰亚胺溶液的体积比为400：20：20；所述磷酸缓冲盐溶液浓度10mmol/L，pH值为7.4。 12.根据权利要求8或11所述的制备方法，其特征在于：所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶液和N-羟基硫代琥珀酰亚胺溶液都是用浓度50mmol/L，pH 6.0的2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲液新鲜配制的，配制后其浓度都为1mg/mL。 13.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：步骤3)所述磷酸缓冲盐溶液浓度10mmol/L，pH值7.4，并含有0.5％(w/v，g/ml)吐温20；所述重悬液与燕窝糖蛋白标记抗体Y1和封闭剂的质量体积比100μL：0.1mg：5μL；所述振荡2h；所述封闭剂为5％牛血清白蛋白溶液。 14.一种权利要求1～7任意一项所述试纸条的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤： a、结合垫的制备：取权利要求3所述结合垫，用权利要求8～13任意一项所述方法制备的荧光团-燕窝糖蛋白标记抗体Y1喷涂，在37～52℃温度下干燥2～8h，得包被荧光微球-燕窝糖蛋白标记抗体Y1的结合垫； b、反应膜的制备：取反应膜，将燕窝糖蛋白包被抗体Y2喷涂在检测区，将羊抗兔IgG多克隆抗体喷涂在质控区； c、试纸条的制备：将步骤a)制得的结合垫、步骤b)制得的反应膜、吸水纸垫从左至右依次黏贴在PVC底板上，即得。 15.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于：所述结合垫每1cm2喷涂荧光团-燕窝糖蛋白标记抗体Y1 50～500ng；所述检测区每1cm2喷涂燕窝糖蛋白包被的抗体Y2 50～500ng；所述质控区每1cm2喷涂羊抗兔IgG多克隆抗体100～1000ng。
所属类别：	发明专利