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原文传递一种快速联检吡虫啉和多菌灵的竞争型荧光免疫层析试纸条、荧光探针及应用

专利名称：	一种快速联检吡虫啉和多菌灵的竞争型荧光免疫层析试纸条、荧光探针及应用
摘要：	本发明公开了一种快速联检吡虫啉和多菌灵的竞争型荧光免疫层析试纸条、荧光探针及应用，属于农药残留检测技术领域。试纸条包括PVC底板、样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，其中，硝酸纤维素膜上的T线包被有农药半抗原，C线包被有羊抗鼠抗体。荧光探针为硅核多层量子点壳纳米球‑农药单克隆抗体免疫复合物。有益效果：本发明的试纸条具有良好的稳定性、优越的分散性、高发光性能和免疫特性，与待测溶液混合后侧流至T线处与包被抗原结合，T线在紫外灯下呈现红色荧光，其余的与C线上包被抗体结合，使用商用荧光读取仪可以实现对吡虫啉和多菌灵残留的定量检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	安徽;34
申请人：	中国科学院合肥物质科学研究院
发明人：	王澍;郑帅;汪崇文;王珍妹;张龙;李志刚;刘勇
专利状态：	有效
申请日期：	2023-06-30T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-07T00:00:00+0800
申请号：	CN202310808757.2
公开号：	CN117007793A
代理机构：	合肥市浩智运专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	王宏平
分类号：	G01N33/543;G01N33/533;G01N21/64;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N33/543;G01N33/533;G01N21/64
申请人地址：	230031 安徽省合肥市蜀山区蜀山湖路350号
主权项：	1.一种快速联检吡虫啉和多菌灵的竞争型荧光免疫层析试纸条，其特征在于，其由样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴在PVC底板上组成；所述硝酸纤维素膜在吸水垫向样品垫方向依次设有质控线C、检测线T1和检测线T2；所述质控线包被有羊抗鼠IgG抗体；所述检测线T1包被有吡虫啉半抗原；所述检测线T2包被有多菌灵半抗原。 2.根据权利要求1所述的快速联检吡虫啉和多菌灵的竞争型荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述羊抗鼠IgG抗体的浓度为0.06～0.1mg/mL。 3.根据权利要求1所述的快速联检吡虫啉和多菌灵的竞争型荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述吡虫啉半抗原的浓度为0.1～0.3mg/mL。 4.根据权利要求1所述的快速联检吡虫啉和多菌灵的竞争型荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述多菌灵半抗原的浓度为0.3～0.5mg/mL。 5.一种吡虫啉和多菌灵的荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)硅核多层量子点的制备： S1：采用改进的化学沉淀法制备粒径为180～220nm的纳米SiO2颗粒； S2：向步骤S1制得的纳米SiO2颗粒的水溶液中加入PEI溶液，超声处理，离心，清洗，重悬在去离子水中，得到PEI包覆SiO2颗粒的水溶液(SiO2-PEI)； S3：向SiO2-PEI水溶液中加入红色量子点(CdSe/ZnS-MPA QDs)，超声处理，离心，清洗，重悬在无水乙醇溶液中，得到硅核单层量子点复合纳米颗粒(SiO2-QBs)； S4：将SiO2-QBs颗粒继续重复步骤S2和S3，制备出硅核多层量子点复合纳米颗粒(SiO2-MQBs)； (2)SiO2-MQB偶联农药抗体： S5：将步骤S4得到的SiO2-MQBs溶液离心，弃去上清，沉淀物用MES缓冲液复溶，超声分散；加入EDC水溶液和NHS水溶液，超声处理，得到羧基活化的SiO2-MQBs； S6：离心去除过量的EDC和NHS，将沉淀物重悬在含有吐温-20的PBS缓冲液中，加入吡虫啉和多菌灵单克隆抗体，涡旋混合均匀，放置在恒温振荡仪上室温孵育后，加入牛血清白蛋白水溶液封闭未结合的羧基位点； S7：离心，用含有吐温-20的PBS缓冲液洗涤，将沉淀物复溶在含有吐温-20的PBS缓冲液中，即得。 6.采用权利要求5所述的制备方法制得的吡虫啉和多菌灵的荧光探针。 7.权利要求1-4任一项所述的试纸条和/或权利要求6所述的荧光探针在食品中吡虫啉和多菌灵残留检测中的应用。 8.一种快速联检吡虫啉和多菌灵残留的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1)制备待测食品样品液：将食品样本捣碎，称取食品样品于离心管中；加入含有甲醇和磷酸盐缓冲液的提取液，充分振荡后，超声混匀；静置后，使用MCE水系针头过滤器收集食品样品上清液，用含有吐温-20的PBS缓冲液稀释，制得待测食品样品液； 2)对待测食品样品液进行检测：取待测食品样品液，加入权利要求6所述的吡虫啉和多菌灵的荧光探针，涡旋混合均匀；将权利要求1-4任一项所述的竞争型荧光免疫层析试纸条样品垫朝下插入混合溶液中，室温开始色谱反应，在紫外灯照下肉眼观察试纸条荧光强度，对检测结果进行定性分析； 3)当待测食品样品液中含有一定浓度吡虫啉、多菌灵时，检测线T1和T2不显示荧光，质控线C显示红色荧光，即结果为阳性；当待测样品液中无目标物存在时，检测线T1和T2和质控线C均显示红色荧光，即结果为阴性；使用荧光读取仪读取检测线T1和T2的荧光强度值，将平均荧光信号带入建立的浓度与荧光强度的标准曲线中，即得残留的吡虫啉和多菌灵的浓度。 9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中平均荧光信号为每个样本重复三次并测量的荧光信号平均值；所述标准曲线的建立具体为根据测定吡虫啉和多菌灵三倍稀释浓度下的农药标准品，测量检测线上的荧光信号值，建立浓度与荧光强度的标准曲线。 10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤3)吡虫啉和多菌灵的检测限分别为吡虫啉：1.94pg/mL、多菌灵：14.79pg/mL。
所属类别：	发明专利