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原文传递一种DNA逻辑门纳米器件在细胞表面蛋白染色中的应用

专利名称：	一种DNA逻辑门纳米器件在细胞表面蛋白染色中的应用
摘要：	本发明属于有机复合材料技术领域，具体涉及一种DNA逻辑门纳米器件在细胞表面蛋白染色中的应用。本发明首先提供一种利用DNA逻辑门纳米器件对细胞表面蛋白进行原位染色的具体方法。所述方法包括合成DNA逻辑门纳米器件，利用该纳米器件底端识别靶蛋白并通过逻辑运算暴露出顶端触发序列，触发形成含有重复G‑四链体结构的DNA纳米纤维，进而催化诱导聚多巴胺的限域氧化沉积，从而对细胞膜表面的靶蛋白进行原位染色。本发明可实现原位对低丰度蛋白的显色。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	重庆;50
申请人：	中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院
发明人：	王振强;张蓉;李国兵;黄景彬;刘荣兴;周胡悦;王奎
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-25T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-24T00:00:00+0800
申请号：	CN202311078558.7
公开号：	CN117110625A
代理机构：	重庆恩洲知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	易真珍
分类号：	G01N33/68;G01N21/78;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N33/68;G01N21/78
申请人地址：	400037 重庆市沙坪坝区新桥正街83号
主权项：	1.一种利用DNA逻辑门纳米器件对细胞表面蛋白进行原位染色的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：通过DNA自组装反应合成DNA纳米三棱柱，将触发序列、靶蛋白核酸适配体序列与所述DNA纳米三棱柱共孵育，构建出DNA逻辑门纳米器件，所述触发序列的核苷酸序列如SEQID.NO.5所示；步骤2：加入互补序列，所述互补序列与步骤1构建的DNA逻辑门纳米器件上的触发序列以及靶蛋白核酸适配体序列结合，将所述触发序列和靶蛋白核酸适配体序列暂时封闭；步骤3：培养细胞，将细胞与步骤2中的DNA逻辑门纳米器件共孵育，当细胞膜表面存在靶蛋白时，所述靶蛋白核酸适配体序列与靶蛋白结合，触发逻辑门运算以使所述触发序列暴露；步骤4：在步骤3的反应体系中进一步加入发夹序列孵育，所述发夹序列与所述触发序列结合，使结合在靶蛋白上的DNA逻辑门纳米器件顶端形成G4纳米线结构，所述发夹序列的核酸序列如SEQID.NO.2～4所示；步骤5：在步骤4的反应体系中进一步加入血红素；步骤6：在步骤5的反应体系中一步加入多巴胺和H2O2，室温孵育10-120min，形成黑色聚多巴胺纤维，从而对细胞膜表面靶蛋白显色。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞膜表面靶蛋白为蛋白质二聚体。 3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述蛋白质二聚体为HER2:HER3异二聚体，其适配体核苷酸序列如SEQ ID NO.6～7所示。 4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述互补序列包括第1互补序列、第2互补序列、第3互补序列和第4互补序列，所述互补序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.8-11所示。 5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤4中加入发夹序列的孵育时间为1-2h。 6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA逻辑门纳米器件的摩尔浓度为10-100nM。 7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述G4纳米线上包括多个交错排列的G-四链体，单个G-四链体与血红素的摩尔比为1:1～1:50。 8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1-5在自组装缓冲液中进行，所述自组装缓冲液的成分包括20mM Tris、200mM NaCl、2mM MgCl2和20mM KCl；步骤6在水溶液中进行。 9.DNA逻辑门纳米器件在细胞膜表面蛋白原位染色中的应用，其特征在于，所述DNA逻辑门纳米器件底端通过靶蛋白核酸适配体序列与细胞膜表面靶蛋白结合，顶端结合具有多个聚多巴胺氧化沉积位点的G4纳米线对所述靶蛋白显色。 10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述G4纳米线由SEQID.NO.2～4所示的发夹序列通过杂交链式反应组装得到。
所属类别：	发明专利