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原文传递蛋白样品的处理方法及蛋白组分析方法

专利名称：	蛋白样品的处理方法及蛋白组分析方法
摘要：	本申请涉及一种蛋白样品的处理方法，包括如下步骤：将蛋白样品与烷基化试剂混合，封闭游离的半胱氨酸，得到封闭后样品；将所述封闭后样品通过超滤膜后进行离心处理，得到膜上样品；所述超滤膜的孔径范围为10kDa～30kDa；对所述膜上样品进行第一次还原，得到第一还原后样品；向所述第一还原后样品中加入生物素标记试剂，得到标记后样品；酶解所述标记后样品，得到酶解后样品；向所述酶解后样品中加入亲和素微珠状琼脂糖吸附生物素标记的蛋白，得到富集后样品；对所述富集后样品进行还原及烷基化处理，获得处理后样品。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖南;43
申请人：	中信湘雅生殖与遗传专科医院有限公司
发明人：	张珅;雷姣;胡建敏;汪星瑶;林戈
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-28T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-10T00:00:00+0800
申请号：	CN202311089573.1
公开号：	CN117030899A
代理机构：	华进联合专利商标代理有限公司
代理人：	侯武娇
分类号：	G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/14;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/14
申请人地址：	410000 湖南省长沙市高新开发区桐梓坡西路567号
主权项：	1.一种蛋白样品的处理方法，其特征在于，包括如下步骤：将蛋白样品与烷基化试剂混合，封闭游离的半胱氨酸，得到封闭后样品；将所述封闭后样品通过超滤膜后进行离心处理，得到膜上样品；所述超滤膜的孔径范围为10kDa～30kDa；对所述膜上样品进行第一次还原，得到第一还原后样品；向所述第一还原后样品中加入生物素标记试剂，得到标记后样品；酶解所述标记后样品，得到酶解后样品；向所述酶解后样品中加入亲和素微珠状琼脂糖吸附生物素标记的蛋白，得到富集后样品；对所述富集后样品进行还原及烷基化处理，获得处理后样品。 2.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，将所述富集后样品进行还原及烷基化处理，获得处理后样品的步骤包括：将所述富集后样品进行第二次还原，得到第二还原后样品；将烷基化试剂加入到所述第二还原后样品中进行烷基化处理，获得处理后样品。 3.根据权利要求2所述的处理方法，其特征在于，将蛋白样品与烷基化试剂混合的步骤所使用的烷基化试剂和所述将烷基化试剂加入到所述第二还原后样品中进行烷基化处理的步骤所使用的烷基化试剂分别独立地选自碘乙酰胺、氯乙酰胺、碘乙酸和N-乙基马来酰亚胺中的至少一种。 4.根据权利要求2所述的处理方法，其特征在于，所述第一次还原的步骤所使用的还原剂和所述第二次还原的步骤所使用的还原剂分别独立地选自二硫苏糖醇和三羧基乙基膦中的至少一种。 5.根据权利要求1～4任一项所述的处理方法，其特征在于，所述生物素标记试剂包括HPDP-生物素。 6.根据权利要求1～4任一项所述的处理方法，其特征在于，所述亲和素微珠状琼脂糖的直径为45μm～165μm。 7.根据权利要求1～4任一项所述的处理方法，其特征在于，所述酶解所述标记后样品的步骤包括采用蛋白酶进行酶解；所述蛋白酶选自胰蛋白酶、胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、赖氨酰内切酶和精氨酸内切酶中的至少一种。 8.根据权利要求7所述的处理方法，其特征在于，所述蛋白酶和所述标记后样品的质量比为1:(20～100)。 9.根据权利1～4任一项所述的处理方法，其特征在于，所述蛋白样品与烷基化试剂混合的步骤之前，还包括对蛋白样品进行前处理的步骤，所述前处理的步骤包括：向所述蛋白样品加入0.1wt％～1wt％非离子型表面活性剂进行超声裂解，得到前处理样品，后续将所述前处理样品与烷基化试剂混合。 10.一种蛋白组分析方法，其特征在于，采用权利要求1～9任一项所述的处理方法获得处理后样品，对所述处理后样品进行色谱-质谱分析。
所属类别：	发明专利