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一种检测CTC抵抗NK细胞杀伤的试剂盒及其应用
| 专利名称： | 一种检测CTC抵抗NK细胞杀伤的试剂盒及其应用 |
| 摘要： | 本发明公开了一种检测CTC抵抗NK细胞杀伤的试剂盒及其应用。本发明基于RNA‑seq技术结合QRT‑PCR技术检测发现，血小板可上调CTC表面CD155表达；通过体内实验，进一步发现CD155高表达促进肝癌细胞免疫逃逸，NK细胞的功能下降，且杀伤能力减弱。因此，本发明提出一种通过直接检测CTC上粘附性的血小板以及CTC表面CD155表达，而无需将NK细胞及肿瘤细胞共培养，即可评估CTC抵抗NK细胞杀伤的能力的试剂盒。本发明试剂盒可用于直接检测免疫逃逸型CTC，尤其是检测逃避NK细胞杀伤的CTC，通过对CTC上CD155染色即可进行评估，无需与NK细胞共培养，大大减少了试剂成本及操作时间。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 上海;31 |
| 申请人： | 复旦大学附属中山医院 |
| 发明人： | 郭玮;孙云帆;樊嘉;周俭;王蓓丽;杨文静;潘柏申 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2023-08-14T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2023-11-17T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN202311022320.2 |
| 公开号： | CN117074691A |
| 代理机构： | 上海申汇专利代理有限公司 |
| 代理人： | 翁若莹 |
| 分类号： | G01N33/68;G01N33/58;G01N1/30;G01N21/64;G;G01;G01N;G01N33;G01N1;G01N21;G01N33/68;G01N33/58;G01N1/30;G01N21/64 |
| 申请人地址： | 200032 上海市徐汇区医学院路136号 |
| 主权项： | 1.检测试剂在制备用于检测CTC抵抗NK细胞杀伤的试剂盒中的应用，其特征在于，所述检测试剂至少包括：用于检测CTC标志物EpCAM、Pan-CK的试剂，用于检测白细胞标志物CD45的试剂，用于检测细胞核标志物DAPI的试剂，用于检测血小板标志物CD41的试剂，以及免疫抑制性检查点一抗CD155。 2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测试剂具体包括：Alexa Fluor 555标记的Pan-ck，PE标记的EpCAM一抗混合物，Alexa Fluor 647标记的CD45一抗，FITC标记的CD155一抗，Alexa Fluor 647标记的CD41一抗，和细胞核染液DAPI。 3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测试剂的浓度分别为：0.1mg/mLAlexa Fluor 555标记的Pan-ck，0.1mg/mL PE标记的EpCAM一抗混合物，0.1mg/mL AlexaFluor 647标记的CD45一抗，0.25μg/100μL FITC标记的CD155一抗、Alexa Fluor 647标记的CD41一抗，8.4μM细胞核染液DAPI。 4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括：含0.2％多聚甲醛固定剂、含0.3％皂苷及0.5％牛血清白蛋白的破膜剂、含20％的牛血清白蛋白的封闭液、以及含0.1％防腐剂的细胞洗液。 5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测试剂用于单个样本检测的抗体用量为：45μL Pan-ck一抗、2μL EpCAM一抗、45μL CD45一抗、5μL CD155一抗、10μL CD41一抗和100μL细胞核染液DAPI。 6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述固定剂、破膜剂和细胞洗液的用量分别为：200μL、100μL、10mL。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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