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原文传递一种基于微流控囊袋技术的质谱样本前处理方法和应用

专利名称：	一种基于微流控囊袋技术的质谱样本前处理方法和应用
摘要：	本发明提供了一种基于微流控囊袋技术的质谱样本前处理方法及应用，上述前处理包括将待处理的样本和试剂集成于微流控囊袋的芯片内的不同功能区中，通过相互挤压不同功能区实现样本的混合处理，完成所述芯片内的磁珠的洗涤、上样、淋洗和洗脱的步骤，实现对样本的前处理。本发明的技术方案是基于LC‑MS技术，采用微流控囊袋、磁珠法流体样本处理芯片进行血清样品的小分子化合物进行前处理工序，前处理步骤全程在密闭的芯片中一次性完成，无需人工进行样品或试剂的转移，节约了人工操作，也无需与外界环境接触，避免了样本与环境之间的交叉污染问题；区别于现有技术中的磁固相萃取的前处理方法，为LC‑MS的前处理提供了新的处理方式。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	翊新诊断技术(苏州)有限公司
发明人：	张林玉;苏小莉;戴敬;王世立
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-08T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-14T00:00:00+0800
申请号：	CN202310993398.2
公开号：	CN117054574A
代理机构：	南京利丰知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	王锋
分类号：	G01N30/06;B01L3/00;G01N1/38;G;B;G01;B01;G01N;B01L;G01N30;B01L3;G01N1;G01N30/06;B01L3/00;G01N1/38
申请人地址：	215000 江苏省苏州市高新区富春江路188号9号楼301、302室
主权项：	1.一种基于微流控囊袋技术的LC-MS的样本前处理方法，包括将待处理的样本和试剂集成于微流控囊袋的芯片内的不同功能区中，通过相互挤压不同功能区实现样本的混合处理，完成所述芯片内的磁珠的洗涤、上样、淋洗和洗脱的步骤，实现对样本的前处理。 2.根据权利要求1所述的基于微流控囊袋技术的LC-MS的样本前处理方法，其特征在于，所述芯片内的功能区至少包括中央室、样本池、淋洗液池、磁珠池、结合液池和洗脱液池；所述样本池与所述磁珠池通过连接微沟道连通；所述中央室与其它各功能区通过阀门连通，通过所述中央室的控制各功能区内的液体进入所述磁珠池内；所述样本经所述样本池进入所述磁珠池后，经所述中央室的控制，所述磁珠池依次经洗涤液-结合液-淋洗液-洗脱液对样本进行处理，实现对所述样本的前处理。 3.根据权利要求2所述的基于微流控囊袋技术的LC-MS的样本前处理方法，其特征在于，所述样本的前处理步骤均在所述磁珠池内进行；所述洗涤步骤包括：将所述淋洗液池中的淋洗液进入所述磁珠池，对所述磁珠池进行洗涤；所述上样步骤包括：所述磁珠池经洗涤后，所述样本池中的样本、所述结合液池中的结合液分别进入所述磁珠池内，将待测的小分子化合物结合在磁珠上；所述洗脱步骤包括：再将所述洗脱池内的洗脱液进入所述磁珠池中，将待测的小分子化合物从磁珠上洗脱，洗脱后的洗脱液排出，前处理步骤完成，进入液相色谱中进行分析。 4.根据权利要求3所述的基于微流控囊袋技术的LC-MS的样本前处理方法，其特征在于，所述淋洗液池包括第一淋洗液池和第二淋洗液池；所述第一淋洗液池罐装第一淋洗液；所述第二淋洗液池罐装第二淋洗液；所述洗涤步骤包括一次洗涤步骤和二次洗涤步骤；所述一次洗涤步骤为所述上样步骤之前进行；所述二次洗涤步骤在所述上样步骤之后进行。 5.根据权利要求4所述的基于微流控囊袋技术的LC-MS的样本前处理方法，其特征在于，所述二次洗涤步骤在所述上样步骤和所述洗脱步骤之间进行；经上样步骤后，所述样本与所述磁珠结合后，所述第二淋洗液进入所述磁珠池进行二次洗涤。 6.根据权利要求3所述的基于微流控囊袋技术的LC-MS的样本前处理方法，其特征在于，所述洗脱池与所述出液口连通；所述洗脱步骤完成后，洗脱液返回所述洗脱池内，经所述出液口排除所述芯片。 7.根据权利要求3所述的基于微流控囊袋技术的LC-MS的样本前处理方法，其特征在于，所述样本进入所述磁珠池后，各步骤的处理时间分别为：洗涤步骤处理时间为5min；上样步骤的处理时间为13min；淋洗步骤的处理时间为2min；洗脱步骤的处理时间为10min。 8.根据权利要求1-7任一项所述的基于微流控囊袋技术的LC-MS的样本前处理方法，其特征在于，所述样本为人体血清样本；待检测的小分子化合物为25羟基维生素D2和25羟基维生素D3。 9.根据权利要求8所述的基于微流控囊袋技术的质谱样本前处理方法，其特征在于，所述人体血清进入所述样本池前还包括预处理步骤；所述预处理包括在所述人体血清样本加入蛋白沉淀剂后，经过震荡并离心后，去上层清液，即得到预处理后的样本；将所述预处理后的样本罐装至所述样本池内；所述结合液为含有磁珠的甲醇溶液；所述洗涤液为纯净水；所述淋洗液为20％乙腈溶液；所述洗脱溶液为乙腈和异丙醇体积比为1∶1的溶液；所述蛋白沉淀剂为甲醇溶液；优选地，在添加所述蛋白沉淀剂的同时添加内标化合物，对样本进行定量分析。 10.根据权利要求1-9任一项所述的基于微流控囊袋技术的LC-MS的样本前处理方法在血清样本的小分子化合物定量分析中的应用。
所属类别：	发明专利