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原文传递一种用末端转移酶介导生物素标记扩散染色质检测精子DNA碎片的方法

专利名称：	一种用末端转移酶介导生物素标记扩散染色质检测精子DNA碎片的方法
摘要：	本发明公开了一种用末端转移酶介导生物素标记扩散染色质检测精子DNA碎片的方法，其步骤如下：将载有处理后精液标本的载玻片置入环境温度下冷藏，取出冷藏后的载玻片，在室温下将载玻片浸入盐酸内，使精子DNA变性；将处理过的载玻片浸入精子裂解液内，置入缓冲液中，将载玻片由缓冲液中取出后用乙醇进行脱水，再制备末端转移酶介导生物素标记反应混合液；将处理后的载玻片，置入磷酸缓冲液中洗3 次，然后取末端转移酶介导生物素标记反应混合液置于载玻片上，将反应后的载玻片洗片后滴入工作液避光反应，然后用蒸馏水冲洗，在显微镜下将精子染色液A液和B 液滴于载玻片上，晾干后观察结果。本发明不需要昂贵的检测仪器及试剂、精子标本可保存、试验结果可靠、晕环清晰、分辨率高。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	张丽红
发明人：	张丽红;邱毅;王磊光;王秋菊;刘艳;王克华;李娟
专利状态：	有效
申请日期：	2009-04-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN200910014933.5
公开号：	CN101550447
代理机构：	山东济南齐鲁科技专利事务所有限公司
代理人：	宋永丽
分类号：	C12Q1/68(2006.01)I
申请人地址：	250002山东省济南市市中区玉函路69号山东省计划生育科学技术研究所
主权项：	1、一种用末端转移酶介导生物素标记扩散染色质检测精子DNA碎片的方法，其特征在于：步骤如下： ①将载有处理后精液标本的载玻片置入4℃环境温度下冷藏4-7分钟； ②取出冷藏后的载玻片，在室温为22℃下将载玻片浸入0.08N的盐酸内7分钟，使精子DNA变性； ③将经过步骤②处理过的载玻片浸入20-30毫升的精子裂解液内20分钟，精子裂解液的组份及制备方法是：按重量比取6.404克三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、1.46 克乙二胺四乙酸和11.680克氯化钠混合后，加90毫升蒸馏水进行溶解，溶解后再加入1毫升曲拉通X-100和6.17克的二硫代苏糖醇，然后定容至100毫升，调PH 值至7.5； ④将经过步骤③处理过的载玻片置入20-30毫升三羟甲基氨基甲烷-硼酸-乙二胺四乙酸二钠盐缓冲液中3分钟； ⑤将载玻片由三羟甲基氨基甲烷-硼酸-乙二胺四乙酸二钠盐缓冲液中取出后依次用70％、90％和100％的乙醇进行脱水，每次脱水2分钟； ⑥制备末端转移酶介导生物素标记反应混合液：将1微升脱氧核糖核苷酸末端转移酶、1微升生物素标记的脱氧尿苷三磷酸和98微升平衡缓冲液混匀备用； ⑦将经过步骤⑤处理后的载玻片，置入20微升、PH值为7.5的磷酸缓冲液中洗3次，每次3分钟，然后取100毫升末端转移酶介导生物素标记反应混合液置于载玻片上，加盖玻片或封口膜置入37℃环境下暗的湿盒内反应1小时； ⑧将载玻片由湿盒中取出，置入磷酸缓冲液中洗3次，每次3分钟，洗后滴100 微升连接辣根过氧化物酶的链霉亲和素，室温下反应30分钟； ⑨将步骤⑧中反应后的载玻片洗片后滴入100微升3，3′-二氨基联苯胺四盐酸盐工作液，避光反应10分钟，然后用蒸馏水冲洗2次后晾干； ⑩在显微镜下将精子染色液A液5毫升滴于载玻片上，15秒钟后吸掉未反应的溶液，再滴于载玻片上5毫升精子染色液B液，10秒钟后吸掉未反应的溶液，再用蒸馏水洗2次，晾干后观察结果。
所属类别：	发明专利