原文传递
一种同时检测香蕉束顶病毒和花叶心腐病毒的检测方法
| 专利名称： | 一种同时检测香蕉束顶病毒和花叶心腐病毒的检测方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种同时检测香蕉束顶病毒和花叶心腐病毒的检 测方法，其特征在于包括以下步骤：(1)香蕉病叶总核酸的提取； (2)RT-PCR扩增和(3)电泳分析。本发明的目的是为了克服现 有技术中的不足之处，提供一种方法简单，只需通过一次检测就能同 时检测出香蕉束顶病毒和花叶心腐病毒，有效减少样品交叉污染，检 测效率高且准确的检测方法。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 广东;44 |
| 申请人： | 陈定虎;王龙贵;杨雷亮 |
| 发明人： | 陈定虎;王龙贵;杨雷亮;王 宏;管 维;王章根;王云华 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2008-04-18T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN200810027597.3 |
| 公开号： | CN101561415 |
| 代理机构： | 中山市科创专利代理有限公司 |
| 代理人： | 尹文涛 |
| 分类号： | G01N27/447(2006.01)I |
| 申请人地址： | 528400广东省中山市中山市中山六路2号 |
| 主权项： | 1、一种同时检测香蕉束顶病毒和花叶心腐病毒的检测方法，其 特征在于包括以下步骤： (1)、香蕉病叶总核酸的提取： a、分别剪取感染BBTV、CMV和复合感染BBTV及CMV的香蕉病 株幼叶0.1g； b、在液氮(-196℃)下研磨成粉末状，迅速加入900μL经过 65℃预热的CTAB抽提缓冲液，转入2mL的离心管中，65℃水浴30min， 期间不时摇匀； c、加入900μLl氯仿/异戊醇(V∶V/24∶1)，温和地摇匀，室温 下用小型台式离心机12000rpm离心8min； d、将上清液转到新的2mL离心管中，加入1/10体积的3mol/L NaAc(pH5.2)和2.5×体积冰冷的无水乙醇，-20℃放置2hr，然后在 4℃下12000rpm离心10min； e、弃上清液，用400μL无RNase的70％的乙醇将RNA振荡悬 浮，使RNA沉淀中的盐离子被充分溶解，再次离心10min以沉淀RNA， 小心倒掉上清液，随后快速离心5s，将管壁上的乙醇收集到管底后， 用小枪头吸净，置于超净台上吹5min左右，最后用50μL DEPC水溶 解沉淀，-20℃贮存备用； (2)、RT-PCR扩增 反应引物 BBTV引物：BBTV-P1：5’-ATGTGGTATGCTGGATGTTC-3’ BBTV-P2：5’-GTTCATATTTCCCGCTTTGA-3’ CMV引物：CMV-P1：5’-CACCCAACCTTTGTGGGTAG-3’ CMV-P2：5’-CAACACTGCCAACTCAGCTC-3’ 在0.2mL的薄壁PCR管中分别加入去离子水3.5μL、2×buffer 12.5μL、扩增酶混合液1μL、扩增BBTV和CMV基因片段的上、下 游引物(P1，P2)各1μL(10μmol/L)、香蕉病叶总核酸1μL(0.5μg)， 混合均匀后，进行一步法RT-PCR扩增，并以从健康无病毒侵染的香 蕉叶片中提取的总核酸为阴性对照；其中RT-PCR扩增过程：50℃ 30min，94℃3min；然后94℃1min，52℃1min，72℃1min，共35个 循环； (3)、电泳分析 取5μL反应产物在用1×TAE缓冲液配制的1％的琼脂糖凝胶上 进行电泳分析。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
检索历史
应用推荐
