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原文传递检测病毒的方法

专利名称：	检测病毒的方法
摘要：	本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及一种检测病毒的方法，包括步骤：将正电荷多肽与第一纳米金混合处理，得到团聚的第二纳米金；将待测样本依次与抗待测病毒单抗、抗待测病毒的多克隆抗体、生物素标记的二抗以及同时修饰有链霉亲和素和包裹蛋白酶的脂质体的磁球进行孵育，分离洗涤，得到第四复合物；其中，所述蛋白酶对所述正电荷多肽能够进行特异性切割；将表面活性剂添加到所述第四复合物中进行混合处理，得到释放产物；将所述释放产物添加到第二纳米金溶液中，通过所述第二纳米金溶液的颜色变化，判断所述待测样本中是否含有待测病毒。本发明检测病毒方法，检测结果裸眼可视化，操作简单快速，抗干扰性强、灵敏度高，无需任何仪器。
专利类型：	发明专利
申请人：	熊玲红
发明人：	熊玲红;何学文
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T08:00:00+0805
申请号：	CN201911397955.4
公开号：	CN111122868A
代理机构：	深圳中一联合知识产权代理有限公司
代理人：	曹柳
分类号：	G01N33/58;G01N33/577;G01N33/569;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/569
申请人地址：	518000 广东省深圳市南山区龙珠大道龙苑路8号
主权项：	1.一种检测病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：获取修饰有负电荷多肽的第一纳米金，将正电荷多肽与所述第一纳米金混合处理，得到团聚的第二纳米金；所述第一纳米金和所述第二纳米金具有不同的颜色；将待测样本与抗待测病毒单抗进行第一次孵育，分离洗涤，得到第一复合物；将抗待测病毒的多克隆抗体添加到所述第一复合物中进行第二次孵育，分离洗涤，得到第二复合物；将生物素标记的二抗添加到所述第二复合物中进行第三次孵育，分离洗涤，得到第三复合物；将同时修饰有链霉亲和素和包裹蛋白酶的脂质体的磁球添加到所述第三复合物中进行第四次孵育，分离洗涤，得到第四复合物；其中，所述蛋白酶对所述正电荷多肽能够进行特异性切割；将表面活性剂添加到所述第四复合物中进行混合处理，得到释放产物；将所述释放产物添加到第二纳米金溶液中，通过所述第二纳米金溶液的颜色变化，判断所述待测样本中是否含有待测病毒。 2.如权利要求1所述的检测病毒的方法，其特征在于，所述第一纳米金的溶液呈第一颜色，所述第二纳米金的溶液呈第二颜色。 3.如权利要求2所述的检测病毒的方法，其特征在于，判断所述待测样本中是否含有待测病毒的步骤包括：当所述第二纳米金溶液的颜色由第二颜色向第一颜色变化时，说明所述待测样本中含有所述待测病毒；当所述第二纳米金溶液的颜色保持第二颜色不变时，说明所述待测样本中不含有所述待测病毒。 4.如权利要求1～3任一所述的检测病毒的方法，其特征在于，获取修饰有负电荷多肽的第一纳米金的步骤包括：按所述负电荷多肽与纳米金的物质的量之比大于等于2500:1，将所述负电荷多肽与所述纳米金混合处理，得到第一纳米金；和/或，所述正电荷多肽与所述第一纳米金的物质的量之比为(140～160)：1。 5.如权利要求4所述的检测病毒的方法，其特征在于，所述负电荷多肽上带有巯基；和/或，所述正电荷多肽上带有能够被所述蛋白酶特异性识别的酶切位点。 6.如权利要求5所述的检测病毒的方法，其特征在于，所述纳米金的粒径为10～20纳米；和/或，所述第二纳米金溶液的浓度为8～15nM；和/或，所述磁球表面修饰的脂质体中包含有3000～4000单位的蛋白酶。 7.如权利要求1～3、5～6任一所述的检测病毒的方法，其特征在于，制备所述第一复合物的步骤包括：将待测样本添加到包覆有所述抗待测病毒单抗的酶联免疫吸附板中，在温度为37℃的条件下，孵育12小时以上，洗涤所述酶联免疫吸附板后封闭处理，再次洗涤，得到第一复合物。 8.如权利要求7所述的检测病毒的方法，其特征在于，所述磁球的制备包括步骤：将含有羧基的磁球、所述包裹蛋白酶的脂质体和所述链霉亲和素，在温度为20～37℃的条件下，孵育4小时以上，得到同时修饰有链霉亲和素和包裹蛋白酶的脂质体的所述磁球。 9.如权利要求8所述的检测病毒的方法，其特征在于，所述第二次孵育的条件包括：在温度为37℃的条件下，孵育1小时以上；和/或，所述第三次孵育的条件包括：在温度为37℃的条件下，孵育1小时以上；和/或，所述第四次孵育的条件包括：在温度为37℃，转速为100～200rpm的条件下，孵育1小时以上。 10.如权利要求1～3、5～6、8～9任一所述的检测病毒的方法，其特征在于，当所述待测病毒为EV71病毒时，所述抗待测病毒单抗选自抗VP1单克隆抗体，所述抗待测病毒的多克隆抗体选自抗VP1多克隆抗体；当所述待测病毒为ZIKV病毒时，所述抗待测病毒单抗选自抗gE单克隆抗体，所述抗待测病毒的多克隆抗体选自抗gE多克隆抗体；当所述待测病毒为H7N9病毒时，所述抗待测病毒单抗选自抗HA单克隆抗体，所述抗待测病毒的多克隆抗体选自抗HA多克隆抗体。
所属类别：	发明专利