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一种乙酰胆碱酯酶荧光生物传感器的制备方法
| 专利名称： | 一种乙酰胆碱酯酶荧光生物传感器的制备方法 |
| 摘要： | 一种乙酰胆碱酯酶荧光生物传感器的制备方法，涉及一种乙酰胆碱酯酶荧 光生物传感器的制备方法。本发明解决了现有酶生物传感器受环境影响造成酶 活性丧失，造成假阳性；酶的价格昂贵，不可逆反应造成生物传感器无法多次 使用，仪器成本过高；选择性不高等问题。一种乙酰胆碱酯酶荧光生物传感器 的制备方法的步骤为：首先对鲫鱼脑乙酰胆碱酯酶进行提取分离、纯化，然后 采用壳聚糖将鲫鱼脑乙酰胆碱酯酶进行固定化，制备出固定化乙酰胆碱酯酶 膜，即得酰胆碱酯酶荧光生物传感器。 本发明制备的乙酰胆碱酯酶荧光生物传感器，具有不需连接外部电源、不 用参考电极、体积小、质量轻、响应速度快、抗电磁干扰、防腐蚀、灵敏度很 高、测量带宽很宽、操作简便、成本低廉等优点。可应用于食品中有机磷农药 的快速检测。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 黑龙江;23 |
| 申请人： | 王振宇 |
| 发明人： | 王振宇;焦 岩 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2009-06-11T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN200910072240.1 |
| 公开号： | CN101581670 |
| 分类号： | G01N21/64(2006.01)I |
| 申请人地址： | 150001黑龙江省哈尔滨市南岗区第二方圆里30号1单元121号 |
| 主权项： | 1、一种乙酰胆碱酯酶荧光生物传感器的制备方法，其特征在于乙酰胆碱 酯酶荧光生物传感器的制备方法的步骤如下：一、乙酰胆碱酯酶的提取：1、 将购买的活鲫鱼头于自制冰盒保存，剪开头骨，再用镊子将整个脑组织取出， 以滤纸吸去血丝，并除去非脑组织，放入表面皿中称重。2、Tris-HCl浸提法含 0.1％Triton X-100和0.05mol/LNaCl的Tris-HCl冰浴条件下匀浆(每15s，间歇 5s)。匀浆液在0～4℃离心(10000r/min)10min。二、纯化：1、脱盐将硫酸铵 分级盐析后，Tris-Hcl(0.07mol/l，pH＝8)溶解的酶液装入透析袋中，对蒸馏 水透析48h，并用BaCl2溶液检测透析袋外溶液，直至透析袋外溶液与BaCl2 溶液无沉淀生成。2、使用SephadexG-200凝胶层析柱(2.5cm×60cm)，洗脱 液为缓冲液，以一定的流速每管3ml进行收集，测定每管酶液比活力，检测时 做三个平行样。三、乙酰胆碱酯酶固定化：壳聚糖膜吸附-交联法固定化乙酰 胆碱酯酶：取0.2g壳聚糖粉末，加入1％醋酸10mL，室温下磁力搅拌5～10min， 至形成黄色溶胶。4℃，10000r/min离心3min，除去不溶颗粒。将纤维素膜 (1cm×1cm×0.04cm)置于该溶胶中浸泡12h，取出在自制晾干床上晾干后再置于 0.1mol/L、pH值为8.0的PBS浸泡12h，取出，晾干备用。将50μl酶液用移 液器喷涂在已制备的壳聚糖膜两面，置于4℃吸附，用戊二醛于4℃进行交联， 取出膜，用PBS将多余的戊二醛洗净，吸干，即制得壳聚糖酶膜。晾干最后 得到乙酰胆碱酯酶荧光生物传感器。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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