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原文传递检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法

专利名称：	检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法
摘要：	本发明公开了检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法，包括：步骤一、制备碳量子点并将其配制成碳量子点溶液；步骤二、制备不同浓度的乙酰胆碱酯酶标准溶液，并分别向其中加入乙酰胆碱溶液、胆碱氧化酶溶液、辣根过氧化物酶溶液和邻苯二胺溶液，得混合液系；步骤三、分别向混合液系中加入碳量子点溶液，得标准样品系；步骤四、分别检测标准样品系在442nm处和573nm处的荧光强度I442和I573，建立I573/I442与乙酰胆碱酯酶浓度之间的线性关系式；步骤五、配制乙酰胆碱酯酶待测溶液，参照步骤二、三、四，获得乙酰胆碱酯酶待测溶液中的乙酰胆碱酯酶的浓度。本发明具有能进行样品中乙酰胆碱酯酶的高灵敏识别等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	南宁师范大学
发明人：	黄珊;肖琦;姚建东;刘义
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-09T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201910384883.3
公开号：	CN110044860A
代理机构：	北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	靳浩
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	530023 广西壮族自治区南宁市西乡塘区明秀东路175号
主权项：	1.检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法，其特征在于，包括：步骤一、制备碳量子点并将其配制成碳量子点溶液；步骤二、制备不同浓度的乙酰胆碱酯酶标准溶液，并分别向其中加入相同体积的乙酰胆碱溶液、胆碱氧化酶溶液、辣根过氧化物酶溶液和邻苯二胺溶液，混合反应后，得混合液系；步骤三、分别向所述混合液系中加入相同体积的所述碳量子点溶液，混合反应后，得标准样品系；步骤四、分别检测所述标准样品系在442nm处和573nm处的荧光强度I442和I573，建立I573/I442与乙酰胆碱酯酶浓度之间的线性关系式；步骤五、配制与步骤二中的乙酰胆碱酯酶标准溶液体积相同浓度未知的乙酰胆碱酯酶待测溶液，参照步骤二、三，制得待测样品并测定其荧光强度I442和I573，根据I573/I442与乙酰胆碱酯酶浓度之间的线性关系式，即可计算出所述乙酰胆碱酯酶待测溶液中的乙酰胆碱酯酶的浓度。 2.如权利要求1所述的检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法，其特征在于，步骤一中，碳量子点的制备方法为：取木炭1g和200mL浓度为5mmoL的HNO3溶液，混匀后，在120℃油浴下磁力搅拌回流8h，将回流后的反应液过滤，得到上清液；用NaOH溶液调节所述上清液的pH值至中性，再过滤，取滤下物，冷冻干燥，即得。 3.如权利要求1所述的检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法，其特征在于，所述碳量子点溶液的浓度为5.3×10-6g/mL，所述不同浓度的乙酰胆碱酯酶标准溶液的浓度分别为0U/L、2U/L、5U/L、10U/L、25U/L，所述乙酰胆碱溶液的浓度为1.2×10-3mol/L，所述胆碱氧化酶溶液的浓度为4U/mL，所述辣根过氧化物酶溶液的浓度为1×10-5g/mL，所述邻苯二胺溶液的浓度为3×10-2mol/L，且上述溶液均采用Tris-HCl缓冲溶液配制，所述Tris-HCl缓冲溶液的pH为7.4、浓度为0.05mol/L。 4.如权利要求3所述的检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法，其特征在于，所述不同浓度的乙酰胆碱酯酶标准溶液的具体配制方法为：先利用乙酰胆碱酯酶干粉配置浓度为1000U/L的原液，再将所述原液用所述Tris-HCl缓冲液进行梯度稀释，即得。 5.如权利要求1所述的检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法，其特征在于，步骤二中，混合反应的条件为：反应温度37℃、反应时间30min。 6.如权利要求1所述的检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法，其特征在于，步骤三中，混合反应的条件为：反应温度25℃，反应时间1min，反应过程中使用微量进样器进行搅拌。 7.如权利要求1所述的检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法，其特征在于，步骤四中，荧光检测的条件为：激发波长为380nm，激发和发射狭缝均为5nm。
所属类别：	发明专利