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原文传递肺癌标志物检测免疫层析试纸及应用

专利名称：	肺癌标志物检测免疫层析试纸及应用
摘要：	本发明属于癌症检测技术，肺癌标志物检测免疫层析试纸及应用。现有技术单一肿瘤标志物的检测无法满足临床早期诊断、鉴别诊断的要求。本发明通过双抗夹心免疫层析技术对血清中的NSE、CEA进行联合检测，实现肺癌的早期诊断。本发明的制备步骤是：制备胶体金—神经元NSE和胶体金—癌胚抗原CEA抗体复合物：制备双抗体夹心NSE、CEA检测试纸条。本发明在肺癌检测中的步骤为：配置系列浓度CEA和NSE标准品：用正常人血清配制NSE、CEA 混合抗原溶液；将试纸条的样品垫端分别插入上述浓度系列标准品中观察NC 膜上T、C线颜色的变化。本发明优点是：测试操作简便；灵敏性高；结果准确；提早4～12周确定肺癌复发。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海师范大学
发明人：	沈鹤柏;孙红英;方菲;赵露晶
专利状态：	有效
申请日期：	2009-07-21T00:00:00+0800
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN200910055141.2
公开号：	CN101609096
代理机构：	上海伯瑞杰知识产权代理有限公司
代理人：	季申清
分类号：	G01N33/577(2006.01)I
申请人地址：	200234上海市徐汇区桂林路100号
主权项：	1.一种肺癌标志物检测免疫层析试纸的制备，包括如下步骤： (1)制备胶体金-神经元特异性烯醇化酶NSE抗体复合物： a.将胶体金与0.1M K2CO3溶液按体积比为100∶1～3的比例混合，调节pH至 7.0～10.0，混合均匀； b.将NSE单克隆抗体按胶体金溶液体积的1/125～1/100加入胶体金溶液中，充分混合，静置10min； c.加入10％BSA(牛血清白蛋白)溶液，使终浓度为1～3％，充分混合，静置10min； d.将上述所得的胶体金溶液8000～10000rpm(转/分钟)离心15min； e.制备硼酸盐缓冲液：硼酸0.01M、蔗糖0.5～1.0％、BSA(牛血清白蛋白)2～5％、余量为蒸馏水； f.吸出上清，沉淀物用硼酸盐缓冲液重新分散至原体积，高速离心分离； G.吸出上清，浓缩至原体积的1/10，4℃保存备用； (2)制备胶体金-癌胚抗原CEA抗体复合物： a.将胶体金用0.1M K2CO3溶液按体积比为100∶1～3的比例调节pH至9.0，混合均匀； b.将CEA单克隆抗体按胶体金溶液体积的1/100～1/80加入胶体金溶液中，充分混合，静置10min； c.加入10％BSA(牛血清白蛋白)溶液，使终浓度为1～3％，充分混合，静置10min； d.将上述所得的胶体金溶液于8000～10000rpm(转/分钟)下离心15min； e.吸出上清，沉淀物用硼酸盐缓冲液重新分散至原体积，高速离心分离； f.吸出上清，浓缩至原体积的1/10，4℃保存备用； (3)制备双抗体夹心NSE、CEA检测试纸条： a.制备样品垫：玻璃纤维素膜剪成5.0×30.0cm规格的条带，放入样品垫封闭液(0.01mol/L PBS(PH＝7.4)，1.0～2.0％BSA，1.0～2.0％蔗糖，0.1～0.5％吐温，0.1～1.0％PVP聚乙烯基吡咯烷酮)中浸泡30min，37℃烘干备用； b.结合垫的制备：选用玻璃纤维素膜作为结合垫材料，将其剪成 1.0×30.0cm规格的条带备用； c.NC(硝酸纤维膜)的制备：将NC膜贴在底板上，用划膜仪在NC膜上不同位置分别划上CEA、NSE单抗和羊抗鼠IgG抗体，作为检测带和质控带； d.免疫层析试纸条的组装：将吸水纸、结合垫、样品垫依次贴在带有粘合剂的底板上，37℃下干燥1h后用自动斩切机切成3cm宽的试纸条。
所属类别：	发明专利