原文传递
一种重组蛋白A基因及其表达产物的制备方法和用途
| 专利名称： | 一种重组蛋白A基因及其表达产物的制备方法和用途 |
| 摘要： | 本发明提供了一种重组蛋白A基因，具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，及由该基因编码的重组蛋白A。本发明还提供了表达该重组蛋白A基因的重组表达载体PET32a-P，和被它所转化的大肠杆菌BL21/DE3，以及制备重组蛋白A的方法。本发明提供的重组蛋白A用于抗体检测、分离、纯化，并能与层析介质载体组成亲和层析介质。本发明生产的重组蛋白A具有蛋白结合特异性强，亲和力高，纯化效率大大改善的优点，与市售的ProteinA Sepharose 4Fast Flow相比，其动态吸附载量明显提高。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 上海;31 |
| 申请人： | 上海国健生物技术研究院 |
| 发明人： | 谈珉;胡辉;郭亚军 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2007-03-14T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201010245004.8 |
| 公开号： | CN101935665A |
| 分类号： | C12N15/31(2006.01)I |
| 申请人地址： | 201203 上海市浦东新区郭守敬路351号1号楼431室 |
| 主权项： | 一种重组蛋白A亲和层析介质的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(1)通过化学合成的方法设计合成重组蛋白A基因单体，5‘端Ala Asp突变成Val Asp，以形成AccI酶切位点，各重组蛋白A基因单体间以AccI酶切位点相连，第一个重组蛋白A基因单体前端加入与表达载体相连的NcoI酶切位点，6个His和EK酶切位点，最后一个重组蛋白A基因单体末端加入中止密码子TAA和与表达载体pET32a相连的BamH I酶切位点；(2)将步骤(1)的重组蛋白A基因单体酶切后接入载体pET32a的相应酶切位点之间，再以Acc I内切酶酶切，连接成包含3个串连重组蛋白A基因单体的重组蛋白A基因表达载体pET32a P；(3)将步骤(2)的表达载体pET32a P转化大肠杆菌BL21/DE3，筛选、酶切，获得重组转化子BL21/pET32a；(4)将步骤(3)的菌株BL21/pET32a进行培养发酵，使其高效表达重组蛋白A，再收集菌体，经分离、纯化得到重组蛋白A产品；(5)用环氧氯丙烷、氢氧化钠与琼脂糖或葡聚糖凝胶在水介质中进行反应，反应产物与步骤(4)获得的重组蛋白A在5 25℃温度下反应15 20小时，反应完后清洗再抽干，获得重组蛋白A凝胶。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
检索历史
应用推荐
