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未结合的分析物的半胱氨酸-标记的荧光探针的开发和应用
| 专利名称： | 未结合的分析物的半胱氨酸-标记的荧光探针的开发和应用 |
| 摘要： | 本发明描述了高通量发现蛋白的方法，所述蛋白在半胱氨酸残基处荧光标记，并且在与未结合的分析物结合时经历两种波长下的荧光比例的改变。本发明公开了在半胱氨酸残基处标记的探针，以及在半胱氨酸和赖氨酸处用两种不同的荧光团标记的探针。这些探针有效用于流体样品中疏水物质的表征和测量，特别是未结合的脂肪酸水平的表征和测量。可以确定个体的未结合的游离脂肪酸的谱型，其可以用来确定所述个体的疾病相对危险度。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 申请人： | FFA科学有限责任公司 |
| 发明人： | 阿兰·马克·克莱费尔德;安德鲁·亨利·休伯;詹姆斯·帕特里克·坎普夫;托马斯·科万;朱宝龙 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2009-01-16T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN200980108448.2 |
| 公开号： | CN101971009A |
| 代理机构： | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 |
| 代理人： | 陈长会 |
| 分类号： | G01N21/76(2006.01)I |
| 申请人地址： | 美国加利福尼亚州 |
| 主权项： | 用于产生和筛选探针的高通量方法，所述方法包括下列步骤：(a)由多核苷酸模板产生编码包括各种iLBP突变蛋白的蛋白文库的多核苷酸突变体文库，所述多核苷酸模板编码包括半胱氨酸残基的iLBP或iLBP突变蛋白；(b)表达由所述多核苷酸文库编码的iLBP突变蛋白；(c)通过结合至固体基质而纯化所述iLBP突变蛋白；(d)将所述基质结合的iLBP突变蛋白与单种荧光团或两种不同的荧光团缔合，以产生探针；(e)由所述固体基质回收所述探针；(f)在存在和不存在一组未结合的目的分析物的条件下，在荧光计中筛选回收的每种探针，从而确定每种探针与该组未结合的目的分析物的结合，所述每种未结合的目的分析物具有确定的未结合浓度；(g)在存在和不存在所述未结合的分析物的条件下，观察在两种不同波长下测量的所述探针的荧光指数比例的改变；和(h)依据所述每种探针针对该组目的分析物的一组荧光响应，表征所述每种探针，其中荧光团共价结合在所述半胱氨酸残基上。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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