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原文传递应用单链DNA适体检测单核增生李斯特氏菌的方法

专利名称：	应用单链DNA适体检测单核增生李斯特氏菌的方法
摘要：	本发明涉及一种应用单链DNA适体检测单核增生李斯特氏菌的方法，同时设定实验组、空白对照组、阴性对照组和阳性对照组，各组经过变性、离心分层、显色及吸光度测后，对实验组的结果进行判定获得最终检测结果。本发明的优点在于：不仅步骤简单、判定标准明确，而且耗时短、效率高、成本相对较低。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	福建;35
申请人：	福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心
发明人：	江树勋;邵碧英;陈文炳;陈彬;缪亭玉
专利状态：	有效
申请日期：	2010-09-07T00:00:00+0800
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201010274816.5
公开号：	CN101949929A
代理机构：	福州市鼓楼区京华专利事务所(普通合伙) 35212
代理人：	翁素华
分类号：	G01N33/569(2006.01)I
申请人地址：	350000 福建省福州市湖东路312号国检广场
主权项：	一种应用单链DNA适体检测单核增生李斯特氏菌的方法，其特征在于：同时设定实验组、空白对照组、阴性对照组和阳性对照组，具体操作如下：步骤100：实验组：A.在含有单链DNA适体的第一试管中加入500μL选择缓冲液后置于95℃温度下加热变性，加热变性5min后于冰块中进行冰浴10min，且其中单链DNA适体的量限定为20 35μL；B.取待检增菌液于第一离心管中，并将其置于离心设备上进行离心分层，且该待检增菌液的量限定为500 1000μL；C.将经过B步骤处理的第二离心管中的沉淀层与经过A步骤处理的第一试管中的溶液进行均匀混合，并将该混合液置于室温下放置30min；空白对照组：重复实验组A步骤后将第一试管于室温下放置30min；阴性对照组：重复实验组的A、B、C步骤，且在B步骤中，将待检增菌液换成非目的菌的菌液；阳性对照组：重复实验组的A、B、C步骤，且在B步骤中，将待检增菌液换成目的菌的菌液，即单核增生李斯特氏菌菌液；步骤200：将所述的实验组、空白对照组、阴性对照组和阳性对照组分别进行如下操作：把步骤100中所得的混合液移入第二离心管中，并将第二离心管置于离心设备上进行高速离心使混合液分层；再加入100μL用抗地高辛抗体标记的碱性磷酸酶进行反应，且该用抗地高辛抗体标记的碱性磷酸酶是经过选择缓冲液稀释的，稀释倍数为15000倍；步骤300：将所述的实验组、空白对照组、阴性对照组和阳性对照组分别进行如下操作：待步骤200的反应进行10min后，将第二离心管再次进行高速离心分层；离心结束弃上清液后再加入500μL选择缓冲液，通过震荡搅拌使第二离心管内混合液悬浮；步骤400：将所述的实验组、空白对照组、阴性对照组和阳性对照组分别进行如下操作：将步骤300所得的悬浮夜进行高速离心分层；离心结束后弃上清液，并将沉淀移入第二试管，重复洗涤第二离心管三次，且每次的洗涤液移入第二试管；接着往第二试管中加入100μL对硝基苯磷酸盐溶液进行显色反应，显色反应30min后加入100μL 2mol/L NaOH使该反应终止；步骤500：将各组显色反应终止后的溶液分别采用酶标仪于405nm波长下进行吸光度测定：若实验组测定所得的吸光度值介于空白对照组和阴性对照组测定所得的吸光度值之间，则实验组的待检增菌液中不含单核增生李斯特氏菌；若实验组测定所得的吸光度值介于阴性对照组和阳性对照组测定所得的吸光度值之间、或大于阳性对照组测定所得的吸光度值，则实验组的待检增菌液中含单核增生李斯特氏菌。
所属类别：	发明专利