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原文传递一种定量检测单增李斯特菌的方法

专利名称：	一种定量检测单增李斯特菌的方法
摘要：	本发明涉及一种定量检测单增李斯特菌的方法，包括以下步骤：（1）制备修饰有4‑MBA的AuNR@Pt和金磁纳米颗粒Fe3O4@Au的试纸条；（2）在试纸条检测区域下方放置磁铁；（3）采用颜色法和SERS法测定样品中的单增李斯特菌含量。通过将经典采用的胶体金置换为磁性金纳米颗粒，采用外加磁场降低其在硝基纤维膜上的移动速率的方式克服了免疫层析技术灵敏度低的缺陷。该方法把磁性纳米颗粒的高选择性、可富集性及流速可控性与免疫层析技术高通量、快速、简捷的优势相结合，大幅提高了检测灵敏度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	齐鲁工业大学
发明人：	吴正宗;崔波;袁超;刘鹏飞;于滨;郭丽;赵海波;陶海腾
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-06T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910841726.0
公开号：	CN110470841A
代理机构：	济南泉城专利商标事务所
代理人：	王翠翠
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	250399 山东省济南市长清区大学路3501号
主权项：	1.一种定量检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）金属模拟酶的制备及修饰：合成AuNR@Pt纳米颗粒，并在AuNR@Pt纳米颗粒表面分别修饰单增李斯特菌抗体和拉曼信标分子4-MBA；（2）金磁纳米颗粒的制备及修饰：合成Fe3O4@Au纳米颗粒，并在Fe3O4@Au表面修饰单增李斯特菌抗体；（3）制备检测线包被单增李斯特菌抗体、质控线包被羊抗鼠IgG抗体、结合垫上含有修饰4-MBA的AuNR@Pt和金磁纳米颗粒Fe3O4@Au的试纸条；（4）在试纸条检测区域下方放置磁铁；（5）采用颜色法和SERS法测定样品中的单增李斯特菌含量。 2.根据权利要求1所述的一种定量检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，所述的磁铁的磁场强度为20mT-200mT。 3.根据权利要求1所述的一种定量检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，所述的试纸条包括衬板、样品垫、纳米颗粒标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述样品垫、磁性纳米颗粒和模拟酶标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸由后到前依次粘贴吸附在所述衬板上，所述硝酸纤维素膜上划有一根检测线和一根质控线；所述检测线包被单增李斯特菌抗体；所述质控线包被羊抗鼠IgG抗体；所述纳米颗粒标记物结合垫有修饰4-MBA的AuNR@Pt和金磁纳米颗粒Fe3O4@Au。 4.根据权利要求3所述的一种定量检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，试纸条的制备方法包括以下步骤：（1）金属模拟酶的制备及修饰：合成金纳米棒AuNR纳米颗粒，在其表面包被一层铂，得到AuNR@Pt纳米颗粒；在AuNR@Pt纳米颗粒表面分别修饰单增李斯特菌抗体和拉曼信标分子4-MBA；（2）金磁纳米颗粒的制备及修饰：合成磁性纳米颗粒Fe3O4，在其表面包被一层金，得到Fe3O4@Au纳米颗粒；在Fe3O4@Au表面修饰单增李斯特菌抗体；（3）结合垫的处理：将合成的AuNR@Pt纳米颗粒溶液和Fe3O4@Au纳米颗粒溶液喷于结合垫上，得到处理后的标记物结合垫；（4）硝基纤维膜的处理：将单增李斯特菌抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测线，将羊抗鼠IgG抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测质控线，烘干，即得到处理后的硝基纤维膜；（5）试纸条的组装：在衬板上依次搭接并粘贴处理后的样品垫、结合垫和硝酸纤维素膜，再在酸纤维素膜的一侧搭接吸水纸，组装后裁剪为60mm长，3.8mm宽的试纸条，即得到所述定量检测单增李斯特菌的免疫层析试纸条，将制得的试纸条与干燥剂一起装入避光袋密封保存待用。 5.根据权利要3所述的一种定量检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，单增李斯特菌抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。 6.根据权利要求1所述的一种定量检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，步骤（3）的具体步骤为：样品溶液在试纸条上层析，结束后，在检测区域加入3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢溶液，反应5分钟后，拍下检测区域的图像，基于图像定量测定样品中的单增李斯特菌含量；同时采用配备785nm激光的拉曼光谱仪采集检测线和质控线的SERS光谱，基于SERS光谱定量测定样品中的单增李斯特菌含量。 7.根据权利要求1所述的一种定量检测单增李斯特菌的方法，其特征在于，金磁纳米颗粒Fe3O4@Au直径为100-500nm。
所属类别：	发明专利