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原文传递奶粉中L-肉碱含量和纯度的测定方法

专利名称：	奶粉中L-肉碱含量和纯度的测定方法
摘要：	本发明公开了一种奶粉中L-肉碱含量和纯度的测定方法，依次包括以下步骤：1)以奶粉为样品进行样品处理；2)分别以L-肉碱标准品和D-肉碱标准品制备标准溶液；3)将步骤2)所得的L-肉碱标准溶液和D-肉碱标准溶液分别对应地制成梯度浓度的L-肉碱衍生溶液和梯度浓度的D-肉碱衍生溶液；4)样品溶液衍生化反应；5)对步骤3)和4)的所得物分别进行高效液相色谱检测；6)获得L-肉碱的浓度cL和D-肉碱的浓度cD；7)获得奶粉样品中L-肉碱含量和纯度。采用本发明的方法测定奶粉中的L-肉碱，能大大提高检测灵敏度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	浙江大学
发明人：	朱加进;童玲;冯盘;朱方
专利状态：	有效
申请日期：	2010-09-07T00:00:00+0800
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201010274573.5
公开号：	CN101975837A
代理机构：	杭州中成专利事务所有限公司 33212
代理人：	金祺
分类号：	G01N30/88(2006.01)I
申请人地址：	310027 浙江省杭州市西湖区浙大路38号
主权项：	一种奶粉中L肉碱含量和纯度的测定方法，其特征是依次包括以下步骤：1)、样品处理：先将奶粉样品10～20g用去离子水溶解后定容至100ml，再分别进行去除乳脂肪和乳蛋白的处理，过滤，所收集的滤液为样品溶液；2)、制备标准溶液：称取50mgL肉碱标准品，以去离子水溶解，并定容至10ml；所得溶液经0.45μm滤膜过滤，得到L肉碱标准溶液；称取50mgD肉碱标准品，以去离子水溶解，并定容至10ml；所得溶液经0.45μm滤膜过滤，得到D肉碱标准溶液；3)、将步骤2)所得的L肉碱标准溶液和D肉碱标准溶液分别进行如下操作：取30μl的L肉碱标准溶液/D肉碱标准溶液放于容量瓶中，加入80μl的0.05M碳酸缓冲液和80μl的1(9芴基)氯甲酸乙酯；将容量瓶放入45℃水浴中放置1h，然后取出容量瓶自然冷却至室温后，向容量瓶中加入去离子水定容至10ml；将定容后的溶液用去离子水稀释，得到L肉碱/D肉碱浓度分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5μg/ml的L肉碱系列衍生溶液/D肉碱系列衍生溶液；将所得的L肉碱系列衍生溶液和D肉碱系列衍生溶液分别用0.45μm微孔滤膜过滤；分别得梯度浓度的L肉碱衍生溶液和梯度浓度的D肉碱衍生溶液；4)、样品溶液衍生化反应：取60μl步骤1)所得的样品溶液于容量瓶中，再加入30μl的0.05M碳酸缓冲液和30μl的1(9芴基)氯甲酸乙酯；将容量瓶放入45℃水浴中放置1h，然后从水浴中取出容量瓶自然冷却至室温后，向容量瓶中加入去离子水定容至10ml；将定容后的溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，得进样液；5)、高效液相色谱法检测：对步骤3)所得的梯度浓度的L肉碱衍生溶液和梯度浓度的D肉碱衍生溶液以及步骤4)所得的进样液分别进行高效液相色谱检测；检测条件如下：选用C18色谱柱，色谱条件为：流动相为∶三乙胺磷酸缓冲液∶乙腈＝73∶27的体积比；流速：lml/min；检测波长：发射波长269nm，检测波长310nm；进样量：10μl；分别得梯度浓度的L肉碱衍生溶液的响应峰面积、梯度浓度的D肉碱衍生溶液的响应峰面积、进样液的响应峰面积；6)、获得L肉碱的浓度cL和D肉碱的浓度cD：以步骤5)所得的梯度浓度的L肉碱衍生溶液的响应峰面积对浓度作图，得L肉碱的标准曲线；以步骤5)所得的梯度浓度的D肉碱衍生溶液的响应峰面积对浓度作图，得D肉碱的标准曲线；将步骤5)所得的进样液的响应峰面积分别与上述L肉碱的标准曲线和D肉碱的标准曲线对比，所得的结果乘以样品溶液在步骤4)的衍生反应中的稀释倍数10*1000/60，从而分别得样品溶液中L肉碱的浓度cL和D肉碱的浓度cD；7)、获得奶粉样品中L肉碱含量和纯度：式中：cL——样品溶液中L肉碱的浓度，μg/ml；m——奶粉的质量，g。式中：cL——样品溶液中L肉碱的浓度，μg/ml；cD——样品溶液中D肉碱的浓度，μg/ml。FSA00000259899600021.tif,FSA00000259899600022.tif
所属类别：	发明专利