专利名称: | 乙型肝炎病毒基因分型和定量检测的方法及试剂盒 |
摘要: | 本发明公开一种乙型肝炎病毒基因分型和定量检测的试剂盒,包括DNA提取试剂和荧光定量PCR试剂;荧光定量PCR试剂包括乙型肝炎病毒B基因型和C基因型的引物,还包括乙型肝炎病毒B基因型标准品和乙型肝炎病C基因型标准品。本发明还公开一种乙型肝炎病毒基因分型和定量检测的方法,其步骤如下:引物及探针的设计合成,临床血清样本的获得,提取乙型肝炎病毒DNA,进行荧光定量PCR反应,结果的判定。本发明分型准确率≥99%,比全序列分析比对的方法简单便捷,同时又比常规的PCR及酶切鉴定的方法更准确;可以在同一反应体系内同时检测中国人最常见的乙型肝炎病毒B基因型和C基因型,并且同时可以定量检测,更加节约成本和降低工作量,创新性明显。 |
专利类型: | 发明专利 |
国家地区组织代码: | 重庆;85 |
申请人: | 重庆医科大学;黄爱龙;赵耀 |
发明人: | 黄爱龙;赵耀;张秀瑜;单幼兰 |
专利状态: | 有效 |
申请日期: | 2010-10-29T00:00:00+0800 |
发布日期: | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
申请号: | CN201010524174.X |
公开号: | CN101956025A |
代理机构: | 重庆华科专利事务所 50123 |
代理人: | 徐先禄 |
分类号: | C12Q1/70(2006.01)I |
申请人地址: | 400016 重庆市渝中区医学路1号 |
主权项: | 乙型肝炎病毒基因分型和定量检测的试剂盒,其特征是:包括DNA提取试剂和荧光定量PCR试剂;其中的DNA提取试剂包括含6mol/L异硫氰酸胍、30mol/L柠檬酸钠、体积为0.58%的十二烷基磺酸钠、1mol/L乙二胺四乙酸钠、体积为2%的糖原的A液和B液-异丙醇;其中的荧光定量PCR试剂包括:含100mmol/LpH8.9的TrisHCl、500mmol/LKCl,体积为50%的甘油的10×PCR缓冲液;浓度为25mmol/L的MgCl2;浓度为5mmol/L的dNTP(三磷酸脱氧核糖核苷);浓度为5U/μl的TaqDNA聚合酶;浓度为1U/μl为UDG酶(尿嘧啶N糖基化酶);荧光定量PCR试剂还包括下述探针和相对应的引物:乙型肝炎病毒B基因型的引物序列为:HBVBF:AGACTCGTGGTGGACTTC浓度为10μmol/LHBVBR:ACAAGAAGATGAGGCATAGC浓度为10μmol/L乙型肝炎病毒B基因型的探针序列为:HBVBP:5’TCGCAGTCCCAAATCTCCA3’浓度为3μmol/L荧光探针的5’端标记的荧光报告基因是FAM,3’端标记的荧光受体基因为BHQ1的淬灭基团;乙型肝炎病毒C基因型的引物序列为:HBVCF:CTTGTTGGTTCTTCTGGACTAC浓度为10μmol/LLHBVCR:AGGATGATGGGATGGGAATAC浓度为10μmol/L乙型肝炎病毒C基因型的探针序列为:HBVCP:5’CCTCTACTTCCAGGAACATCAAC3’浓度为3μmol/L荧光探针的5’端标记的荧光报告基因是HEX,3’端标记的荧光受体基因为BHQ1的淬灭基团。 |
所属类别: | 发明专利 |