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一种基于液相芯片检测微小核糖核酸的方法
| 专利名称： | 一种基于液相芯片检测微小核糖核酸的方法 |
| 摘要： | 本发明涉及一种检测核糖核酸的方法，尤其是一种检测微小核糖核酸（microRNA）的方法，属于生物技术领域。利用不对称PCR扩增结合液相芯片技术，先在生物样品中加入定量的外源性microRNA，将microRNA进行预扩增及扩增得到扩增产物，并将修饰后的含有microRNA特征信息的特异性检测探针与荧光微球偶联制成液相芯片，扩增产物与液相芯片杂交后通过液相芯片检测仪检测，通过比较待检测microRNA的荧光信号与外源性microRNA的荧光信号的相对水平达到相对定量检测microRNA的目的，为microRNA的定量检测提供新的途径。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 江苏省疾病预防控制中心 |
| 发明人： | 崔仑标;葛以跃;史智扬;戚宇华;赵康辰;单云峰;周明浩;汪华 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2010-11-11T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201010539260.8 |
| 公开号： | CN101962685A |
| 代理机构： | 南京苏科专利代理有限责任公司 32102 |
| 代理人： | 何朝旭 |
| 分类号： | C12Q1/68(2006.01)I |
| 申请人地址： | 210009 江苏省南京市江苏路172号 |
| 主权项： | 一种基于液相芯片检测微小核糖核酸的方法，包括以下步骤：步骤一、制备液相芯片，从Sanger MiRBase数据库中选取成熟的microRNA序列作为探针序列,在所述探针序列的5’端加上C12 分子臂和氨基修饰，并将修饰后的探针与不同编码的荧光微球偶联，得到特异性检测微球，即液相芯片；步骤二、设计引物和探针，在所述成熟的microRNA序列后8位反向互补序列的5’端加上CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAG组成反转录引物，剩余序列的5’端加上ACACTCCAGCTGGG组成正向引物；并设计通用正、反向引物，在通用反向引物5’端第1位及第5位T碱基以生物素标记，在通用正向引物的第3位和第5位碱基进行锁核酸修饰；步骤三、在待检测的RNA中加入外源性人工合成的2种microRNA ，加入量为每50 ng待测RNA各加5 fmol；步骤四、对待测样品RNA进行反转录反应，得到合成的cDNA；步骤五、对所述cDNA进行预扩增反应，得到预扩增产物；步骤六、对所述预扩增产物进行不对称PCR扩增反应，得到待测样品的PCR扩增产物；步骤七、将所述待测样品的PCR扩增产物与特异性检测微球杂交，得到杂交反应产物；步骤八、将所述杂交反应产物离心弃上清后，与链霉菌抗生物素蛋白 藻红蛋白反应，得到反应产物；步骤九、用液相芯片检测仪对步骤八中的反应产物进行检测，得到检测结果。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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